 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 1786 | 回復(fù): 13 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
HX91926銅蟲(chóng) (小有名氣)
|
[交流]
麻煩問(wèn)一下實(shí)驗(yàn)室做表達(dá)經(jīng)常不成功是怎么回事 已有8人參與
|
||
|
實(shí)驗(yàn)室做的都是基因克隆，轉(zhuǎn)化，然后表達(dá)，實(shí)驗(yàn)室比較新，也不太有錢(qián)，大家所有的步驟都是一樣的，用的都是pet-28a（+）質(zhì)粒，剪切酶都是BamHⅠ、HindⅢ，都是導(dǎo)入到bl21（d3）中，表達(dá)都是用iptg誘導(dǎo)，但是據(jù)我所知，往屆的學(xué)姐學(xué)長(zhǎng)們，表達(dá)做出來(lái)的都很少，大部分都是做到轉(zhuǎn)化成功，然后做不出來(lái)，換題了。 現(xiàn)在我做自己的題也是，到轉(zhuǎn)化怎么也不成功，我們這一屆5個(gè)人，就一個(gè)人成功了，從轉(zhuǎn)化開(kāi)始各種條件我感覺(jué)都做過(guò)了，就是看不到條帶 這是不是通病啊，問(wèn)題會(huì)不會(huì)出在構(gòu)建體系和轉(zhuǎn)化體系部分。好像我們老師并沒(méi)有換體系的意思啊，咋辦 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有175人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
wfp008
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 8356.6
- 紅花: 1
- 帖子: 1367
- 在線: 143小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3447103
- 注冊(cè): 2014-09-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 應(yīng)用光學(xué)
14樓2014-10-19 09:59:18
2樓2014-10-14 10:34:39
yonglu
銅蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 254.6
- 帖子: 23
- 在線: 7.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 822937
- 注冊(cè): 2009-08-06
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-10-16 11:15:24
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-10-16 11:15:24
| 這個(gè)原因太多了。首先，要轉(zhuǎn)化進(jìn)入細(xì)胞之前，肯定是構(gòu)建含正確目標(biāo)序列的表達(dá)載體。怎么驗(yàn)證你的表達(dá)載體構(gòu)建正確了？酶切，測(cè)序，PCR擴(kuò)增等方法。這些都沒(méi)有問(wèn)題嗎？如果一切OK，那么就考慮是否是要轉(zhuǎn)化的細(xì)胞沒(méi)有處理好感受態(tài)，根本就沒(méi)轉(zhuǎn)進(jìn)去呢？轉(zhuǎn)化后的培養(yǎng)，相比也設(shè)置了，陰性對(duì)照（空的轉(zhuǎn)化細(xì)胞），陽(yáng)性對(duì)照（含空質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化細(xì)胞），以及含有你表達(dá)序列的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。三種同時(shí)培養(yǎng)，都有細(xì)胞篩選出來(lái)嗎？后期驗(yàn)證的時(shí)候，當(dāng)然也是要陽(yáng)性對(duì)照和目的條帶一起PCR驗(yàn)證了。涉及到的操作步驟較多，試劑也多，建議還是要仔細(xì)審查每一步驟，確保每一步操作都正確吧。 |
3樓2014-10-14 11:23:05
lxj341401
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 111074
- 注冊(cè): 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2014-10-14 11:34:17
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求收留 +5 | 1943443204 2026-03-28 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +6 | 愛(ài)羈絆 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +11 | 北道巷 2026-03-24 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +13 | 新時(shí)代材料 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +4 | secret0328 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 食品工程專碩一志愿中海洋309求調(diào)劑 +4 | 小張zxy張 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703本科鄭州大學(xué)求調(diào)劑 +3 | nhj_ 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿9，初試成績(jī)：338，四六級(jí)已過(guò)，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑！ +4 | Zuhui0306 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)105500求調(diào)劑 +3 | Ssun。。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +12 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 315調(diào)劑 +4 | 0860求調(diào)劑 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +8 | 匹克i 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +5 | 李嘉圖·S·路 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理 材料求調(diào)劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328分調(diào)劑 +6 | 。，。，。，。i 2026-03-23 | 6/300 |
|