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分析-Legion新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
SYBR Green I 會(huì)與ExoIII 之間會(huì)相互影響嗎
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1.在緩沖液中加入SYBR Green I 可以檢測(cè)到較高的熒光強(qiáng)度（1379 au.）;當(dāng)在緩沖液中加入ExoIII，水浴37℃后再加入SYBR Green I 十分鐘后檢測(cè)熒光強(qiáng)度時(shí)只有198.4.這可以說(shuō)明ExoIII會(huì)和SYBR Green I反應(yīng)嗎？ 2..我在加入Exo III 37攝氏度培育半個(gè)小時(shí)后 又將這個(gè)酶滅活了20min ，最后加入染料SG I，十分鐘后檢測(cè)熒光，熒光值還是很低，只有100多。應(yīng)該怎么樣才可以降低Exo III對(duì)SYBR Green I 的影響呢？ |
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2樓2014-10-17 22:27:00
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我做的是讓SYBR Green I 嵌入G四聯(lián)體里面發(fā)光，實(shí)驗(yàn)證明G四聯(lián)體越多，加入相同量的SYBR Green I 得到的熒光強(qiáng)度也是越大的。 另外，我做的另一個(gè)實(shí)驗(yàn)：在形成G四聯(lián)體后（G四濃度不斷增加）加入相同量的Exo III 培育（目的是想證明Exo III不能水解G四聯(lián)體），再加入相同量的SYBR Green I 培育就不會(huì)有逐漸增強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象是在低濃度范圍熒光強(qiáng)度都很低（接近于水平線），在中間濃度時(shí)（5mM）熒光強(qiáng)度達(dá)到最高值，然后隨著G四濃度的增大，熒光強(qiáng)度是不斷降低的。 這個(gè)實(shí)驗(yàn)我已經(jīng)重復(fù)了很多次，每次都是這種現(xiàn)象，這是什么原因呢，是因?yàn)镋xo III可能已經(jīng)剪切了G四聯(lián)體嗎？ |
3樓2014-10-18 09:54:01
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6樓2014-10-20 08:59:27
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7樓2014-10-21 09:39:42
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