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奇怪人生123銀蟲 (小有名氣)
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構(gòu)建絲狀真菌轉(zhuǎn)化子，產(chǎn)生一個(gè)沒(méi)有終止子的基因，請(qǐng)問(wèn)它會(huì)如何轉(zhuǎn)錄和表達(dá)？求大神！ 已有1人參與
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我一直在做灰綠曲霉的相關(guān)研究，為了將我的目的蛋白與GFP融合表達(dá)，所以構(gòu)建一個(gè)叫做pXL-zeo的質(zhì)粒，通過(guò)單交換獲得轉(zhuǎn)化子，見(jiàn)我的附件圖。 最上方的是我構(gòu)建的質(zhì)粒，中間寫有“WT”的是野生株的基因組，最下方“NEW TYPE”指得到的轉(zhuǎn)化子的基因型。 對(duì)于轉(zhuǎn)化子的基因型，在前面的部位產(chǎn)生了一個(gè)有啟動(dòng)子+目的基因完整ORF（但沒(méi)有終止子）的“基因”，緊跟其后的是構(gòu)建質(zhì)粒上的一部分序列，在后面的一坨就是抗性基因和我想要的表達(dá)盒。 那么問(wèn)題來(lái)了！前方“啟動(dòng)子+目的基因完整ORF”會(huì)如何轉(zhuǎn)錄及表達(dá)呢？希望各位大神能稍詳盡的分析，最好能有一些資料。 PS：我對(duì)目的基因和gfp做了Real-time PCR，得到目的基因veA表達(dá)量非常高，gfp表達(dá)量相對(duì)低，但是通過(guò)轉(zhuǎn)化子的表型分析，該轉(zhuǎn)化子更像是目的基因功能缺失的菌株。 單交換.png |
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2樓2014-10-25 10:53:23
奇怪人生123
銀蟲 (小有名氣)
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3樓2014-10-27 12:11:50
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