 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2586 | 回復(fù): 23 | ||
[求助]
易錯PCR酶切與連接 已有8人參與
|
|
做了大半年的易錯PCR，但酶切連接后轉(zhuǎn)化子很少，求助！�。� 我的基因?yàn)?700bp，質(zhì)粒為pET-28（a），酶切位點(diǎn)為BamH I與Xhol，F(xiàn)D、NEB的內(nèi)切酶都試過，效果都不好，請各位大俠賜教。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有72人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 急 分子克隆遇到問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物直接雙酶切后電泳看不到條帶
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 酶切產(chǎn)物能直接做連接反應(yīng)嗎
已經(jīng)有5人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物雙酶切遇到問題，求救�。。�
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物純化后酶切，連接
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 單酶切的大片段連接轉(zhuǎn)化及多個片段的連接轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 請教一個PCR產(chǎn)物直接酶切的問題
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 請教PCR產(chǎn)物酶切后是否可以直接過柱純化而不膠回收？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- （侯氏出品）雙酶切連接反應(yīng)之全攻略
已經(jīng)有89人回復(fù)
- 基因克隆中酶切連接問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物凝膠回收、酶切等問題請教
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 載體連接pcr片段一直連不上
已經(jīng)有17人回復(fù)
- PCR ， 雙酶切，連接問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- PCR鑒定與酶切鑒定
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物酶切檢測不到東西是為什么
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 為什么我做的酶切連接總是不長斑呢？
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PCR產(chǎn)物的突變
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點(diǎn)問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR引物設(shè)計(jì)出來了，但酶切之后電泳沒條帶啊
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】定點(diǎn)突變PCR后加DPN1酶的作用
已經(jīng)有4人回復(fù)
2樓2014-10-31 10:42:34
huangrui1988 
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 73 (初中生)
- 金幣: 1727.8
- 散金: 20
- 紅花: 2
- 帖子: 201
- 在線: 210.1小時(shí)
- 蟲號: 953497
- 注冊: 2010-02-07
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
3樓2014-10-31 10:55:54
厚德求是
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 41 (小學(xué)生)
- 金幣: 2270.6
- 散金: 1050
- 紅花: 3
- 帖子: 1208
- 在線: 107.8小時(shí)
- 蟲號: 2418606
- 注冊: 2013-04-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2014-10-31 13:45:33
5樓2014-10-31 14:43:44
6樓2014-10-31 14:46:03
7樓2014-10-31 14:47:34
huangrui1988
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 73 (初中生)
- 金幣: 1727.8
- 散金: 20
- 紅花: 2
- 帖子: 201
- 在線: 210.1小時(shí)
- 蟲號: 953497
- 注冊: 2010-02-07
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
★ ★
neer(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-11-01 19:26:14
neer(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2014-11-01 19:26:14
|
你把你的突變片擴(kuò)大不就可以了嗎。 你首先構(gòu)建一個野生型的基因在質(zhì)粒上面的，然后往這個基因的上下游各自100bp設(shè)計(jì)引物就可以了。這樣的話，你擴(kuò)出來的片段就會使前面100bp+你的基因片段+后面100bp，經(jīng)過酶切就可以得到你要的基因片段了。這樣做的好處就是你可以避免酶切位點(diǎn)的突變錯誤，易錯PCR一開始的位點(diǎn)很奇葩，經(jīng)常會出現(xiàn)酶切失敗的情況。 |
8樓2014-10-31 23:47:22
9樓2014-11-01 18:29:49
huangrui1988
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 73 (初中生)
- 金幣: 1727.8
- 散金: 20
- 紅花: 2
- 帖子: 201
- 在線: 210.1小時(shí)
- 蟲號: 953497
- 注冊: 2010-02-07
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
10樓2014-11-01 23:33:59
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 neer 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 324分 +5 | llllkkkhh 2026-03-18 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308 085701 四六級已過求調(diào)劑 +7 | 溫喬喬喬喬 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | Mochaaaa 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 277求調(diào)劑 +4 | anchor17 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | ADT 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|