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張冰寶新蟲 (小有名氣)
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[求助]
連接克隆載體提取質(zhì)粒結(jié)果跑出兩條帶 已有6人參與
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最近在做質(zhì)粒的構(gòu)建，將目地片段連接到pmd-18t中。連了很多次，每次16度連接過夜，后轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中，挑菌過夜后進行菌液pcr，每次都有很多雜帶出現(xiàn)，目的條帶也不是很亮。于是提質(zhì)粒鑒定，提出的質(zhì)粒是兩條帶，一條帶大小是我的目的條帶，一條帶大小是我的載體條帶。好幾次都是這種結(jié)果。不知道是什么原因？ 1：為什么提取質(zhì)粒的條帶與雙酶切的跑膠結(jié)果是一樣的呢？這說明我是連接上了還是沒連接上啊？ 2：如果沒有連接上，連接的是空載體，不是應(yīng)該只有空載體的一個帶嗎？大小在2600bp處。為什么還會有我的目的條帶呢？ 3：如果連接上了，提的質(zhì)粒應(yīng)該不能把載體和片段斷開吧？ 實在是不知道怎么回事？請高手幫幫忙分析一下。十萬火急 |
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張冰寶
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5樓2014-11-03 23:29:05
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