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張冰寶新蟲 (小有名氣)
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[求助]
連接克隆載體提取質(zhì)粒結(jié)果跑出兩條帶 已有6人參與
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最近在做質(zhì)粒的構(gòu)建,將目地片段連接到pmd-18t中。連了很多次,每次16度連接過夜,后轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞中,挑菌過夜后進行菌液pcr,每次都有很多雜帶出現(xiàn),目的條帶也不是很亮。于是提質(zhì)粒鑒定,提出的質(zhì)粒是兩條帶,一條帶大小是我的目的條帶,一條帶大小是我的載體條帶。好幾次都是這種結(jié)果。不知道是什么原因? 1:為什么提取質(zhì)粒的條帶與雙酶切的跑膠結(jié)果是一樣的呢?這說明我是連接上了還是沒連接上? 2:如果沒有連接上,連接的是空載體,不是應(yīng)該只有空載體的一個帶嗎?大小在2600bp處。為什么還會有我的目的條帶呢? 3:如果連接上了,提的質(zhì)粒應(yīng)該不能把載體和片段斷開吧? 實在是不知道怎么回事?請高手幫幫忙分析一下。十萬火急 |

新蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
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