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[求助] 人肺組織中提取的總RNA的濃度差異很大? 已有2人參與

采用QIAGEN試劑盒提取人肺石蠟切片組織的總RNA，對(duì)于組織切片大小差不多的樣品，為什么測(cè)出來(lái)的總RNA濃度相差很大，高的可以達(dá)到300-500 ng/uL，低的卻只有20-50 ng/uL，甚至還有幾納克的，請(qǐng)問(wèn)這樣的結(jié)果正常嗎？
對(duì)于一般的肺組織樣品，其總RNA濃度一般是多少呢？請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的蟲(chóng)友指點(diǎn)一下，謝謝。

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1樓 2014-11-11 16:36:28

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若是組織大小差不多的話這樣的情況很異常哎！可以想一下是不是操作過(guò)程中出現(xiàn)的失誤，例如所有的東西是否都經(jīng)過(guò)滅菌，操作過(guò)程中盡量輕柔等……提取出RNA的量不太好說(shuō)，和你組織的量有關(guān)系的！

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2樓2014-11-11 16:45:47

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2樓: Originally posted by wangranjun at 2014-11-11 16:45:47
若是組織大小差不多的話這樣的情況很異常哎！可以想一下是不是操作過(guò)程中出現(xiàn)的失誤，例如所有的東西是否都經(jīng)過(guò)滅菌，操作過(guò)程中盡量輕柔等……提取出RNA的量不太好說(shuō)，和你組織的量有關(guān)系的！

操作的時(shí)候是一致的。是不是幾百納克的濃度不正常？測(cè)的時(shí)候RNA已經(jīng)降解，或者DNA干擾呢？

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3樓2014-11-11 16:55:11

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引用回帖:

3樓: Originally posted by teluoyi815 at 2014-11-11 16:55:11
操作的時(shí)候是一致的。是不是幾百納克的濃度不正常？測(cè)的時(shí)候RNA已經(jīng)降解，或者DNA干擾呢？...

嗯，我猜是的，降解的可能性比較大的

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4樓2014-11-11 17:11:23

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4樓: Originally posted by wangranjun at 2014-11-11 17:11:23
嗯，我猜是的，降解的可能性比較大的...

RNA降解確定是會(huì)導(dǎo)致所測(cè)定的濃度升高嗎，原理是什么呢？因?yàn)槲覍?duì)分子了解較少，所以有些基本問(wèn)題不懂。

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5樓2014-11-11 17:24:26

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引用回帖:

5樓: Originally posted by teluoyi815 at 2014-11-11 17:24:26
RNA降解確定是會(huì)導(dǎo)致所測(cè)定的濃度升高嗎，原理是什么呢？因?yàn)槲覍?duì)分子了解較少，所以有些基本問(wèn)題不懂。...

降解會(huì)使?jié)舛冉档汀话闱闆r下300-500 ng/uL差不多的，以后測(cè)濃度可以看一下260/280

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6樓2014-11-11 17:33:40

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6樓: Originally posted by wangranjun at 2014-11-11 17:33:40
降解會(huì)使?jié)舛冉档汀话闱闆r下300-500 ng/uL差不多的，以后測(cè)濃度可以看一下260/280...

哦，謝謝耐心回復(fù)。

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7樓2014-11-11 17:51:01

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我也是用Ambion的試劑盒提取石蠟切片的，一般有100ng/uL，低的也像你這種情況。提取石蠟最關(guān)鍵的是脫蠟要徹底以及蛋白酶消化要完全，可以適當(dāng)延長(zhǎng)這兩步驟的時(shí)間。畢竟按protocol的方法來(lái)做我覺(jué)得有所差異。

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8樓2014-11-11 23:56:34

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8樓: Originally posted by yvanzeng at 2014-11-11 23:56:34
我也是用Ambion的試劑盒提取石蠟切片的，一般有100ng/uL，低的也像你這種情況。提取石蠟最關(guān)鍵的是脫蠟要徹底以及蛋白酶消化要完全，可以適當(dāng)延長(zhǎng)這兩步驟的時(shí)間。畢竟按protocol的方法來(lái)做我覺(jué)得有所差異。

那你有沒(méi)有那種達(dá)到三四百納克的高濃度呢？我就擔(dān)心我的高濃度是假陽(yáng)性的感覺(jué)。另外你是用的組織切片是多少mg的，或者多大尺寸的？

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9樓2014-11-12 09:19:47

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10樓2014-11-17 09:06:49

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