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sallyquan新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
單酶切后出現(xiàn)兩條距離很近的條帶 已有2人參與
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| 我最近用BamHI單酶切我的載體，跑檢測(cè)膠發(fā)現(xiàn)切開(kāi)了，只有一條帶，膠回收時(shí)發(fā)現(xiàn)有兩條距離很近的帶，且靠近點(diǎn)樣孔的帶偏暗。酶切時(shí)間37℃，40min.這是怎么么回事？是沒(méi)有且徹底？ |
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zshw_001
金蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2014-11-19 16:48:30
youlinglyw
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sallyquan(myprayer代發(fā)): 金幣+3, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 12:18:45
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sallyquan(myprayer代發(fā)): 金幣+3, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 12:18:45
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可能原因如下，按照可能性依次下降排序： 1你的載體沒(méi)有酶切完全，所以造成了你的電泳有兩條帶，一條是環(huán)形的載體，一條是線性的載體 2你的載體上存在不止一個(gè)BamHI位點(diǎn)，這個(gè)可能性很大，最簡(jiǎn)單的方法是把載體全序拿來(lái)瞅瞅，看 a，本身存在不止一個(gè)BamHI位點(diǎn) b，載體本身發(fā)生了突變，需要更換載體（方法是用載體的通用引物去對(duì)載體測(cè)序)。 3你的載體切割完全，但是存在了不同的形態(tài)，這個(gè)還真的存在，但是比較少見(jiàn) 提供如下解決辦法，按順序試試 1酶切時(shí)間比較短，這個(gè)是通例，一般好歹切割5,6個(gè)小時(shí).然后去看看電泳是否有兩條帶（也可以調(diào)整酶的濃度，增加酶量） 2查看載體序列，看是否存在多個(gè)酶切位點(diǎn) 3對(duì)載體進(jìn)行測(cè)序，看載體是否發(fā)生了突變而生成了新的酶切位點(diǎn) |
2樓2014-11-19 10:29:26
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