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山腳下的喵

新蟲 (小有名氣)

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蟲號(hào): 3447014
注冊: 2014-09-28
性別: MM
專業(yè): 植物病理學(xué)

[求助] 病毒提取所用的磷酸緩沖液(PB)

各位大俠，help~！
1，我提病毒顆粒的PB，在4℃冰箱放了幾天后，里面有一些像菌絲的東西，那這個(gè)PB還能用么？
2，病毒顆粒大小是50nm，加入PEG，NaCl后，我用了6500g離心，有些沉淀貼在壁上了，那PB重溶的時(shí)候，能彈下來么？
   我現(xiàn)在把沉淀凍在-20℃了，可以么？
3，以后再用多大的離心力離心呢，是不是可以如下：
   5500g，20min，取上清。
   6600g，20min，沉淀重溶，轉(zhuǎn)管至超速離心管。（這里的差速離心的離心力應(yīng)該怎么確定呢？）
4，往超離管里加的時(shí)候，是先把重溶的沉淀放進(jìn)去么？那超離管配平的時(shí)候，病毒顆粒不就也出來了么？
   我上次用的200nm~300nm的紫外，跑出來的曲線很奇怪。這是參比與樣品調(diào)換后的兩張圖。是因?yàn)橛须s質(zhì)么？
5，怎樣在拍電鏡之前就確定有無病毒顆粒呢？
6，我提的是雙分體病毒，dsRNA，若要用RT-PCR檢測“5”的話，那PB要用DEPC水配嗎？
謝謝各位大神，我問題有點(diǎn)雜，先謝謝大家的耐心~~~

我只有這么多金幣，都用上吧。

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回復(fù)此樓

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高山自有方便路，遠(yuǎn)水自有渡河人？

1樓 2014-12-16 20:36:31

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