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[求助]
關(guān)于酵母篩庫的疑問 已有2人參與
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最近在做酵母篩庫, 誘餌蛋白轉(zhuǎn)的是AH109菌株, 文庫是公司做的Y187酵母菌株. 誘餌蛋白轉(zhuǎn)化了AH109后, 酵母的生長(zhǎng)速率明顯變慢,無論是在平板上還是用SD/-Trp液搖菌的過程中。 用SD/-Trp液搖轉(zhuǎn)化了誘餌蛋白菌株的酵母，用了26個(gè)小時(shí)，挑的還不僅僅是但菌落，才搖到OD600值0.6，然后進(jìn)行了酵母接合生殖，接合生殖20h后有觀察到酵母成功接合的現(xiàn)象。 在酵母接合生殖后，涂在SD/-Leu板上的酵母2天就長(zhǎng)出菌落，但是涂SD/-Trp板上的酵母4天后才長(zhǎng)出較小的菌落，涂二缺板的除了稀釋1/10平板上長(zhǎng)了一個(gè)菌落,其他都暫時(shí)未能長(zhǎng)菌落。四缺板上也暫時(shí)沒有酵母菌落長(zhǎng)出。 希望有這方面經(jīng)驗(yàn)的大牛來解答一下疑問，如果我的目的蛋白對(duì)酵母生長(zhǎng)有一定的抑制作用，還可以這么做嗎？ 另外，我的AH109酵母菌株長(zhǎng)得菌落直徑最大也在5mm, 而這次涂SD/-Leu的Y187菌落有直徑在1CM以上的菌落，這樣正常嗎？ 酵母文庫篩選的方法是按照clonetech的指導(dǎo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的。 |
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4樓2014-12-19 10:35:08
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
2樓2014-12-17 15:19:13
李小同
木蟲 (小有名氣)
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- 注冊(cè): 2012-09-26
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
3樓2014-12-19 10:26:19
5樓2014-12-19 10:35:25
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