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kdliming新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
p43啟動(dòng)子在大腸桿菌中也能啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄嗎 已有4人參與
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| p43啟動(dòng)子是來(lái)源于枯草芽孢桿菌的啟動(dòng)子，在大腸桿菌中能啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄嗎 |
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3樓2014-12-22 10:16:58
ls2046
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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2樓2014-12-22 08:52:47
kdliming
新蟲(chóng) (小有名氣)
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謝謝。那么P43啟動(dòng)子的強(qiáng)度與T7啟動(dòng)子比，誰(shuí)強(qiáng)？還有，在大腸中還是組成型表達(dá)嗎？我碰到的問(wèn)題是，我在pWB980中插入了一個(gè)大腸桿菌的的Ori和Amp抗性基因，構(gòu)建成大腸-枯草的穿梭表達(dá)載體，這個(gè)載體連上目的基因后轉(zhuǎn)化大腸，篩選出含有目的基因的重組載體(經(jīng)過(guò)測(cè)序證明是正確的)，但這個(gè)載體不能被EcoR I、BamH I 和Hind III 切開(kāi)（我就是用這些進(jìn)行酶切連接構(gòu)建的重組載體）。我懷疑是目的基因表達(dá)引起的，因此才有P43啟動(dòng)子是否能做大腸桿菌中啟動(dòng)基因表達(dá)的問(wèn)題。這個(gè)目的基因是個(gè)磺基轉(zhuǎn)移酶基因，并不是什么甲基化酶，它是怎樣引起重組載體不能被限制酶切開(kāi)的呢？還有，這個(gè)重組載體始終沒(méi)法轉(zhuǎn)化到枯草中去，但是穿梭載體可以，我不知道是目的基因有細(xì)胞毒性還他可以是卡那霉素（枯草陽(yáng)性篩選基因）失活。能否談?wù)勀愕目捶�，還有，能否把你的論文先給我看看 ，看看你的分析，謝謝 |
4樓2015-01-03 03:51:16
我是空氣1993
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5樓2015-07-13 17:17:50
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