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guyue900905新蟲 (初入文壇)
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[求助]
我想體外大量表達(dá)某一基因以獲得大量目的物質(zhì),不知道該怎么做呀~~~ 已有2人參與
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我自己現(xiàn)在有點(diǎn)思路,從乳酸菌里提出DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后跑膠進(jìn)行膠回收,轉(zhuǎn)到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中,篩選出陽性克隆,之后該怎么做那?對(duì)陽性克隆進(jìn)行培養(yǎng)?之后的代謝產(chǎn)物中怎么篩出我想要的目的物質(zhì)那? 還是說我這么個(gè)思路就是不對(duì)的。求教高手指點(diǎn)一二,自己很糊涂,謝謝您啦!! |
木蟲 (著名寫手)
金蟲 (正式寫手)
| 你的目的就是獲得目的蛋白是吧,你之前的思路是對(duì)的,首先PCR獲得目的基因,將其構(gòu)建到原核載體中,載體可以是HIS標(biāo)簽的PET系列表達(dá)質(zhì)粒載體或GST標(biāo)簽的PGEX系列表達(dá)質(zhì)粒載體,篩選出陽性克隆后,將陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)入用于表達(dá)的感受態(tài)中,注意培養(yǎng)基中要加IPTG誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)目的蛋白大量表達(dá),然后就可以用相應(yīng)的柱子純化了 |

新蟲 (初入文壇)
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