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guyue900905新蟲 (初入文壇)
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[求助]
我想體外大量表達(dá)某一基因以獲得大量目的物質(zhì)，不知道該怎么做呀～～～ 已有2人參與
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我自己現(xiàn)在有點(diǎn)思路，從乳酸菌里提出DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后跑膠進(jìn)行膠回收，轉(zhuǎn)到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中，篩選出陽性克隆，之后該怎么做那？對陽性克隆進(jìn)行培養(yǎng)？之后的代謝產(chǎn)物中怎么篩出我想要的目的物質(zhì)那？ 還是說我這么個(gè)思路就是不對的。求教高手指點(diǎn)一二，自己很糊涂，謝謝您啦�。。� |
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鬼羽帝魂
木蟲 (著名寫手)
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2樓2014-12-24 11:13:20
董博士
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2015-01-07 16:47:42
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2015-01-07 16:47:42
| 你的目的就是獲得目的蛋白是吧，你之前的思路是對的，首先PCR獲得目的基因，將其構(gòu)建到原核載體中,載體可以是HIS標(biāo)簽的PET系列表達(dá)質(zhì)粒載體或GST標(biāo)簽的PGEX系列表達(dá)質(zhì)粒載體，篩選出陽性克隆后，將陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)入用于表達(dá)的感受態(tài)中，注意培養(yǎng)基中要加IPTG誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)目的蛋白大量表達(dá)，然后就可以用相應(yīng)的柱子純化了 |
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guyue900905
3樓2014-12-28 14:51:00
guyue900905
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4樓2015-01-06 09:47:57
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