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guyue900905新蟲 (初入文壇)
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[求助]
我想體外大量表達某一基因以獲得大量目的物質(zhì)，不知道該怎么做呀～～～ 已有2人參與
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我自己現(xiàn)在有點思路，從乳酸菌里提出DNA,進行PCR擴增，然后跑膠進行膠回收，轉(zhuǎn)到大腸桿菌感受態(tài)細胞中，篩選出陽性克隆，之后該怎么做那？對陽性克隆進行培養(yǎng)？之后的代謝產(chǎn)物中怎么篩出我想要的目的物質(zhì)那？ 還是說我這么個思路就是不對的。求教高手指點一二，自己很糊涂，謝謝您啦�。�！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2015-01-07 16:47:42
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2015-01-07 16:47:42
| 你的目的就是獲得目的蛋白是吧，你之前的思路是對的，首先PCR獲得目的基因，將其構(gòu)建到原核載體中,載體可以是HIS標簽的PET系列表達質(zhì)粒載體或GST標簽的PGEX系列表達質(zhì)粒載體，篩選出陽性克隆后，將陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)入用于表達的感受態(tài)中，注意培養(yǎng)基中要加IPTG誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)目的蛋白大量表達，然后就可以用相應(yīng)的柱子純化了 |
guyue900905
3樓2014-12-28 14:51:00
鬼羽帝魂
木蟲 (著名寫手)
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2樓2014-12-24 11:13:20
guyue900905
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4樓2015-01-06 09:47:57
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