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[求助]
自己設(shè)計的引物添加了酶切位點之后總是P不出來條帶來 已有1人參與
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先把自己的序列與設(shè)計的引物放上來： TATCGAGAATGCACCAATGACCGCAATACATGACCGAGTACTAGCTTCTGGTCAATAAGGCATGTGTTAAACAGGGAAAAGAAACACATACTTCCATTCTGAATCACGGGGAGCATCACTTTCTAAAAACTCACTTGGAGCTTCACTGGGTGCTAGTTTTGAGCTTGGAAATACTGGTGATTTGGACGGCCCAGCGTTGCCCCTCGTTACATCACTACTTAAACCTATCTGTTGAGACATTGTAGAAGAGAAGGAACAAATGTACAACCAGATCGTGAACGGATGTCTTGTACGAAGATATTGCGGTAGTATGGAATTGATGCTCTCTACTCACTTGGATATCGAACTTACTTATAGTTGAATAGTCCACGAAGGATGGAGCCCTGAAGAATCATGTCTGATCAAGATAGATCGGAGGTTCCATGGCTTTTGGAATTGAAGCAACGCCACTCACGATATGTACGGTAGATTGTTAGGACAGATTATTGTTAAACCATCTAGAGAATCTTTCTCCTTAGATGTACGATTGGTACGGTGGGCAGGATTGTCATTTGTATTGCGGCACATCTTGATCGTTCCAATCACCACTGAAGTCGACAAAACCCTTGTTGTTTTATCGTTAGGAGATCAAAGACCACTGGTGGACCTTCTATTTTGGTTTTCTGGGGATTTTGTCAATAAGCTCGTTGTCGTTCGGGGTAAATTATGTAAGATGTGAGTAATAAAGTGGGCCGGACTGCCCGAGAATCCACGGACATTGAGGTCTTCACCATGGACAGACTCGAACTAGTATTTTCATATCATCATCATGTACGACAACTCCTTTCATTCTTCACGTACTCGCAATATCATCTTCAATTAATACACTTAACCTTCGGAGATTATTATTCGTGAAAGTTTTAGTCCATTTGCATCGAATCGGCATGAAGCGATCCCCGCCAATCGATTTGTCTCAGGACGGGCGTAAGGAGAAAATAGCTCGTCGACAGGACCCTGTCTCATGCCAGTTTTGTCGGGCCAAGAAACTCAAGGTAAGAATGCCACTCTAAGAAAGATAACGAATCGCTTCTGACTTCAATAGTGTGATCGCAATTTTCCATGCAGTAATTGCAGAGCTCGCAGACTTCCTTGCGTGTCAGCTGCAGGTCAAGCAGACACTCCAGGTTCCCAGCCGATTAATTCTGTCTCGGCAGGATCGTCAAGGTCAGTGCTGCGGCTTCAATGAGTTTTGCTAGCTTTGTCTCATTATTACTATAATAGTCAAGGGATTGAGGAGTTAAACGCCCGTCTGAGAAGGTTAGAGGAACTTCTAGAAAAAAACATCAATGTATCTAGAAGTTCGAGAGATACCGCATCTGGTATTGCTTTTTCCTTGCAACCCTTCTTGTATCAAATCCTGGCTGACAAAAGGCTAGTCGCCTCGACGCAAGAAACGCCTGCAGAAGATGCCCAAATTACAAATACAGTCTCGTGGTTAGAATCTGATGCTTTCGAGCACCGAAACCTCCAAGAGTCCACAAATTATGTAATTCTATTTCCCTAAAACTTAGCTTCGAAGCGCTAATCAAATAGAATCTTCTATGTTACAATGATGAAATCACACAAACTTTTGCTGCTTCCTTTTTAGGTACGTCGGCTACTACTGTACGAACAGGTGTCGACGCTCAAAGTTTGGCTTCACTTCCGTCTAGAAAGCATGCA 下游序列：，正向引物：5’—3’(SacII)AAACCGCGG（酶切位點）TCGTGAACGGATGTCTTG 反向引物5’—3’(KpnI)AAAGGTACC（酶切位點）GGACTCTTGGAGGTTTCG，自己設(shè)計的引物，構(gòu)建載體時作為下游片段用的，正向的引物TM為66.6度。下游為63度�，F(xiàn)在P出來的條帶完全是彌散的。試過各種方法了，從換體系，梯度PCR到taq酶，所以想換引物了。求大蝦幫助設(shè)計一下引物，酶切位點還是這兩個。不勝感激。 |
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2樓2015-02-06 18:53:06
781055707
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3樓2015-02-07 00:08:34
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