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相守以諾銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
質(zhì)粒線(xiàn)性化跑膠拖帶
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各位蟲(chóng)友，我最近在做重組pPIC9K質(zhì)粒轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115，用Bpu1102 I 內(nèi)切酶進(jìn)行線(xiàn)性化切割，可每次切完以后跑膠都會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重拖帶，在所要的目的條帶（約為11000）處幾乎看不到任何條帶。之前試過(guò)20uL和50uL的體系，可都出現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題，酶切時(shí)間也有嘗試分別用5、3h,可情況均類(lèi)似。注：重組質(zhì)粒所加的量約為體系40%，濃度約為0.5-1ug/uL.所附圖片為50uL體系的電泳圖，三個(gè)通道分別為10000DL的maker、酶切質(zhì)粒、未酶切質(zhì)粒。 酶切.jpg |
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eulota
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4樓2015-01-11 18:54:30
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非常感謝你的幫助。酶是從寶生物買(mǎi)的，污染的可能性較小，那就有可能是水嘍？有沒(méi)有可能是這個(gè)酶非特異性把其他序列給切割了呢？ 5樓2015-01-11 18:57:28
eulota
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