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植物組織培養(yǎng)細(xì)節(jié)很重要 已有4人參與
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植物組織培養(yǎng)是高中生物新課標(biāo)實(shí)驗(yàn)中的重要實(shí)驗(yàn)，通過組培，能提高學(xué)生實(shí)踐動(dòng)手能力、科學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)芰�、技術(shù)推廣能力等，也是學(xué)生最想動(dòng)手操作的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。但許多老師和同學(xué)組組培操作過程中因?yàn)橐恍┘?xì)節(jié)問題的疏忽，最終導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)未能成功。下面為大家總結(jié)組培過程中的注意事項(xiàng)。 1. 培養(yǎng)基的配制 植物組織培養(yǎng)最常用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中包含幾十種化合物，在配制培養(yǎng)基時(shí)切忌“一鍋煮”，就是不能將各種化合物一齊添加進(jìn)去，因?yàn)橛行┗衔锵嘤鰰?huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，因此，一定要等到一種成分溶解之后，再緩慢的添加另一種成分，使其成為均一、無沉淀的培養(yǎng)基。 另外，培養(yǎng)基的pH值會(huì)對培養(yǎng)基的硬度造成影響。若將培養(yǎng)基的pH調(diào)的過高，則會(huì)使培養(yǎng)基變硬，進(jìn)而增加了接種的阻力，從而對外植體造成損傷。若將培養(yǎng)基的pH值調(diào)的過低，則會(huì)使培養(yǎng)基不能凝固，起不到固定外植體的作用。因此，將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至6.0即可。 2. 外植體的選擇 為了使接種后的誘導(dǎo)得以成功，選擇的外植體應(yīng)該是幼嫩的、處于生長旺盛時(shí)期的。而且選擇的外植體的體積不能過小，如若過小則會(huì)影響愈傷組織的形成，從而影響進(jìn)一步的分化。因此，一般接種的外植體體積在0.5~1.0cm2的范圍內(nèi)即可。 3. 消毒 外植體的消毒主要分為兩個(gè)階段。首先是初次消毒，先用流水沖洗，然后用洗衣粉水進(jìn)行刷洗，以去除表面的污垢，最后用流水沖洗20min，完成第一次的消毒。接下來的消毒步驟要在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，在各種消毒劑中升汞的殺菌效果最好，但由于其中含有重金屬，且實(shí)驗(yàn)后的收集工作不易，因此在中學(xué)實(shí)驗(yàn)中不推薦使用升汞。采用酒精消毒30s，2%~10%的次氯酸鈉消毒8~10min即可達(dá)到同樣的消毒效果。 4. 接種 首先，點(diǎn)燃酒精燈，用酒精棉球擦拭雙手，再擦拭實(shí)驗(yàn)用到的器械，然后在火焰上反復(fù)灼燒，放置一旁待到器械溫度不高時(shí)方可用其進(jìn)行操作，以免將外植體燙傷。操作過程中，避免雙手在培養(yǎng)皿上方來回通過造成外植體的污染，可以在每次修剪完外植體后將培養(yǎng)皿的蓋子蓋上，以降低污染率。接種前，要將培養(yǎng)基的瓶蓋在火焰上迅速灼燒(由于目前大部分學(xué)校都在使用塑料組培瓶，因此一定要迅速通過火焰，以防損壞組培瓶)，方可進(jìn)行接種。 5. 培養(yǎng) 接種好的培養(yǎng)瓶放置于光照培養(yǎng)架上，每天給予10h的光照即可滿足外植體分化對光照的需求。 6. 煉苗與移栽 待到無菌苗長至組培瓶的瓶口時(shí)即可進(jìn)行移栽，如若不移栽，則會(huì)影響植株的進(jìn)一步生長，最終導(dǎo)致植株的死亡。移栽之前，首先要對組培苗進(jìn)行煉苗，具體做法為先閉瓶鍛煉3d，再開瓶鍛煉3d，以培養(yǎng)基上開始長菌為移栽的標(biāo)準(zhǔn)。 移栽前，一定要將根部的培養(yǎng)基洗凈，如若沒有洗凈，在種植于土壤中時(shí)，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分會(huì)加劇土壤微生物的生長，降低組培苗的移栽成活率。為了提高組培苗的成活率，可先在滅過菌的珍珠巖或蛭石上培養(yǎng)使根系發(fā)達(dá)再轉(zhuǎn)移到土壤中。 植物組織培養(yǎng)并不像您想象中的那么困難，只要在整個(gè)操作過程中注意到每個(gè)細(xì)節(jié)，一定會(huì)收獲到成功的喜悅! |
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