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5"race 技術(shù)識別轉(zhuǎn)錄起始位點的原理是什么? 已有2人參與
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| 5‘race 為什么可以確定轉(zhuǎn)錄起始位點? |
木蟲 (正式寫手)
| 為什么要做5'race呢,就是cDNA缺少5'信息,找不到合適的引物,所以拉不到全長,5'race就是要在5‘端盡頭找一個引物,通過pcr就能知道全部序列信息了,這個引物怎么找呢,有很多方法,現(xiàn)在常用的就是在5’端(其實是cDNA 3')加poly t,加完了以后用oligo A引物來拉出片段,因為t是加在5'盡頭的,所以5'的序列信息都可以知道,起始知道的是cDNA3'的序列,如果反轉(zhuǎn)錄那一步跑到頭了,那cDNA3‘就可以反應mRNA5'的信息,就是所謂的轉(zhuǎn)錄起始位點了,但反轉(zhuǎn)錄能不能跑到頭是個問題,因此“5’race 技術(shù)識別轉(zhuǎn)錄起始位點”這句話是要打折扣的 |
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