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ginnyzhuzhu新蟲 (初入文壇)
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[求助]
重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)到BL21（DE3）中用T7檢測(cè)沒條帶，用特異引物檢測(cè)有條帶，怎么回事 已有5人參與
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| 在做原核表達(dá)，構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-32a-L，雙酶切大小正確，重組質(zhì)粒用T7還有特異性引物檢測(cè)都正確！但是轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)的時(shí)候長(zhǎng)了滿板的菌，挑了十個(gè)菌，用T7檢測(cè)沒有一個(gè)有條帶，但是用特異引物檢測(cè)都有，到底哪里出了問題？？？？后面換了別人做的感受態(tài)轉(zhuǎn)化，結(jié)果兩個(gè)板只長(zhǎng)了一顆菌，怎么破？求各位大神指點(diǎn)，小女子不勝感激 |
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3樓2015-01-21 10:25:07
781055707
木蟲 (著名寫手)
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| （用T7檢測(cè)沒有一個(gè)有條帶，但是用特異引物檢測(cè)都有），特異引物檢測(cè)陰性有條帶嗎？沒有的話，應(yīng)該是連上了，可以提個(gè)質(zhì)粒，雙切驗(yàn)證一下，T7的引物壞了也是有可能的。BL21(DE3)這個(gè)感受態(tài)連上后，我的基本長(zhǎng)的都很稀疏。二，三十個(gè)菌左右吧。（后面換了別人做的感受態(tài)轉(zhuǎn)化，結(jié)果兩個(gè)板只長(zhǎng)了一顆菌，怎么破？）妥妥的沒連上，有做沒酶切的質(zhì)粒轉(zhuǎn)這個(gè)感受態(tài)嗎？ |
2樓2015-01-21 10:16:13
ginnyzhuzhu
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4樓2015-01-21 10:28:27
ginnyzhuzhu
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5樓2015-01-21 10:30:43
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