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ginnyzhuzhu新蟲 (初入文壇)
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重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)到BL21(DE3)中用T7檢測(cè)沒(méi)條帶,用特異引物檢測(cè)有條帶,怎么回事 已有5人參與
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| 在做原核表達(dá),構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-32a-L,雙酶切大小正確,重組質(zhì)粒用T7還有特異性引物檢測(cè)都正確!但是轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)的時(shí)候長(zhǎng)了滿板的菌,挑了十個(gè)菌,用T7檢測(cè)沒(méi)有一個(gè)有條帶,但是用特異引物檢測(cè)都有,到底哪里出了問(wèn)題????后面換了別人做的感受態(tài)轉(zhuǎn)化,結(jié)果兩個(gè)板只長(zhǎng)了一顆菌,怎么破?求各位大神指點(diǎn),小女子不勝感激 |
木蟲 (著名寫手)
| (用T7檢測(cè)沒(méi)有一個(gè)有條帶,但是用特異引物檢測(cè)都有),特異引物檢測(cè)陰性有條帶嗎?沒(méi)有的話,應(yīng)該是連上了,可以提個(gè)質(zhì)粒,雙切驗(yàn)證一下,T7的引物壞了也是有可能的。BL21(DE3)這個(gè)感受態(tài)連上后,我的基本長(zhǎng)的都很稀疏。二,三十個(gè)菌左右吧。(后面換了別人做的感受態(tài)轉(zhuǎn)化,結(jié)果兩個(gè)板只長(zhǎng)了一顆菌,怎么破?)妥妥的沒(méi)連上,有做沒(méi)酶切的質(zhì)粒轉(zhuǎn)這個(gè)感受態(tài)嗎? |

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