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ginnyzhuzhu新蟲 (初入文壇)
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[求助]
重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)到BL21（DE3）中用T7檢測沒條帶，用特異引物檢測有條帶，怎么回事 已有5人參與
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| 在做原核表達(dá)，構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-32a-L，雙酶切大小正確，重組質(zhì)粒用T7還有特異性引物檢測都正確！但是轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)的時候長了滿板的菌，挑了十個菌，用T7檢測沒有一個有條帶，但是用特異引物檢測都有，到底哪里出了問題？？？？后面換了別人做的感受態(tài)轉(zhuǎn)化，結(jié)果兩個板只長了一顆菌，怎么破？求各位大神指點(diǎn)，小女子不勝感激 |
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9樓2015-01-21 10:49:27
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【答案】應(yīng)助回帖
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| （用T7檢測沒有一個有條帶，但是用特異引物檢測都有），特異引物檢測陰性有條帶嗎？沒有的話，應(yīng)該是連上了，可以提個質(zhì)粒，雙切驗(yàn)證一下，T7的引物壞了也是有可能的。BL21(DE3)這個感受態(tài)連上后，我的基本長的都很稀疏。二，三十個菌左右吧。（后面換了別人做的感受態(tài)轉(zhuǎn)化，結(jié)果兩個板只長了一顆菌，怎么破？）妥妥的沒連上，有做沒酶切的質(zhì)粒轉(zhuǎn)這個感受態(tài)嗎？ |
2樓2015-01-21 10:16:13
3樓2015-01-21 10:25:07
ginnyzhuzhu
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4樓2015-01-21 10:28:27
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