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lxx707金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助：擴線粒體基因組全序，中間有一段怎么都擴不出來，不知道還能采取什么方法？ 已有5人參與
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| 設(shè)計了不下20對引物了，有5對能擴出2000左右的片段，但一般測序不出來。拿去克隆，再測序。再不同公司做了比較，有一段2000bp兩個公司做得一樣，但是NCBI BLAST無結(jié)果。其他三段比對不想似，NCBI上也比不出任何東西。萬能的親們，請多多指教，多給注意，實在是太感謝了！ |
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zshw_001
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3樓2015-01-28 21:08:00
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lxx707(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2015-01-28 22:09:10
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lxx707(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2015-01-28 22:09:10
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一般超過2000長度的，首選Phusion® High-Fidelity DNA Polymerase。 其擴增效率高，錯誤率極低，或許能夠解決你的問題 關(guān)于測序，最好克隆到載體內(nèi)去測序，測序結(jié)果來說，2000bp都什么沒比對上很奇怪，你就是亂打的數(shù)據(jù)都能比對上好多，對于你的描述更多可能是克隆的片段出現(xiàn)問題，并不是你要的東西。 重新在進行克隆測序，會有一些新的提示 |
2樓2015-01-28 19:15:28
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4樓2015-01-28 21:18:18
lxx707
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5樓2015-08-26 16:23:24
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