雪中花sml

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 141.5
帖子: 62
在線(xiàn): 13.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1793852
注冊(cè): 2012-05-03
性別: MM
專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子

[求助] PCR退火溫度設(shè)置已有7人參與

目前做PCR擴(kuò)增，由于目的基因（1300bp）前面一段GC含量比較高的問(wèn)題，設(shè)置的兩條引物，其中一條GC%為80%，Tm為77.7，另一條GC%為45%，Tm為54.3，以大家的經(jīng)驗(yàn)覺(jué)得用這兩條引物擴(kuò)增目的基因的退火溫度應(yīng)該設(shè)置為多少呢

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn) 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有133人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有16人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復(fù)
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦已經(jīng)有3人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

PCR退火溫度為什么要設(shè)置程序升溫？已經(jīng)有9人回復(fù)
PCR引物退火溫度怎么計(jì)算？已經(jīng)有3人回復(fù)
退火溫度的優(yōu)化已經(jīng)有6人回復(fù)
怎么確定變性和退火溫度已經(jīng)有5人回復(fù)
Q-PCR 退火溫度已經(jīng)有6人回復(fù)
反轉(zhuǎn)錄要求42度30分鐘，85 度5分鐘，如果在pcr儀上進(jìn)行，蓋子的溫度要不要設(shè)置。已經(jīng)有28人回復(fù)
PCR中退火溫度的選擇已經(jīng)有11人回復(fù)
普通PCR在一定范圍內(nèi)能夠?qū)崿F(xiàn)線(xiàn)性擴(kuò)增？？已經(jīng)有9人回復(fù)
一種比較詳細(xì)的PCR技術(shù) 已經(jīng)有10人回復(fù)
PCR退火溫度態(tài)度會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增不出目的條帶么？已經(jīng)有4人回復(fù)
TD-PCR 退火溫度及程序的設(shè)計(jì) 已經(jīng)有5人回復(fù)
關(guān)于PCR退火溫度已經(jīng)有17人回復(fù)
關(guān)于real-time PCR溫度優(yōu)化的問(wèn)題已經(jīng)有6人回復(fù)
【求助】高碳鋼高溫退火的溫度怎么設(shè)定？已經(jīng)有13人回復(fù)
【求助/交流】做realtime-PCR，退火溫度很重要嗎？已經(jīng)有15人回復(fù)
【求助/交流】大家看看這對(duì)引物（高G+C含量）的退火溫度設(shè)多少合適已經(jīng)有12人回復(fù)
【求助】PCR退火溫度及時(shí)間如何確定已經(jīng)有10人回復(fù)
【求助/交流】引物長(zhǎng)的話(huà)退火溫度應(yīng)該升高還是降低？已經(jīng)有6人回復(fù)
PCR退火溫度已經(jīng)有14人回復(fù)

向著前方邁進(jìn)

1樓 2015-02-05 19:17:27

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

晞朔

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 201 (大學(xué)生)
貴賓: 0.004
金幣: 844.3
散金: 147
紅花: 13
帖子: 422
在線(xiàn): 185小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 995408
注冊(cè): 2010-04-13
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
雪中花sml(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-05 22:01:26

為何不縮短上游引物長(zhǎng)度，加長(zhǎng)下游引物長(zhǎng)度，看能否接近點(diǎn)？

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2015-02-05 19:27:37

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

781055707

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 291 (大學(xué)生)
金幣: 3118.2
散金: 46
紅花: 19
帖子: 2030
在線(xiàn): 579.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 3046113
注冊(cè): 2014-03-13
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

60度.特異性好的話(huà),退火溫度只能排第二.

[ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ]

贊一下

回復(fù)此樓

采菊東籬下，悠然見(jiàn)南山。

3樓2015-02-05 23:14:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

chibang1220

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
金幣: 5697.7
散金: 68
紅花: 8
帖子: 1435
在線(xiàn): 333.1小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1653055
注冊(cè): 2012-02-29
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子

★
雪中花sml(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-06 20:50:13

為什么要把引物設(shè)計(jì)成這樣？引物長(zhǎng)度在25-35bp特異性都是可以的，在這個(gè)范圍內(nèi)你可以修改2條引物使其Tm值相近，PCR時(shí)選擇合適的退火溫度。你是不是追求2條引物一樣長(zhǎng)了啊？而且你目的基因才1300bp我覺(jué)得即使引物長(zhǎng)度20bp特異性應(yīng)該也不會(huì)太差（個(gè)人意見(jiàn)）

贊一下

回復(fù)此樓

人的差別在于業(yè)余時(shí)間

4樓2015-02-06 08:54:34

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

rv1nm2y

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 17 (小學(xué)生)
金幣: 358.9
紅花: 3
帖子: 137
在線(xiàn): 33.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2518605
注冊(cè): 2013-06-23
性別: MM
專(zhuān)業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
雪中花sml(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-06 20:50:20

可以設(shè)置一個(gè)梯度PCR，并且有的時(shí)候擴(kuò)增與退火溫度沒(méi)有太大關(guān)系，只要合適區(qū)間都可以擴(kuò)出來(lái)。

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2015-02-06 09:51:04

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

我是鋼镚

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
金幣: 2071.1
散金: 13
紅花: 2
帖子: 711
在線(xiàn): 94.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2409376
注冊(cè): 2013-04-09
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 獸醫(yī)傳染病學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
雪中花sml(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-06 20:50:29

可以使用hot phusion hot start DNA polymerase（Thermo）, 退火溫度可以比Tm值高3度，而且可以使用高GC buffer，這個(gè)酶高保真，而且超快，每Kb只要15s。好運(yùn)！

贊一下

回復(fù)此樓

6樓2015-02-06 11:27:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

18761615793

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

小蟲(chóng)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 172 (高中生)
金幣: 646.4
散金: 170
紅花: 16
帖子: 863
在線(xiàn): 144.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 3603131
注冊(cè): 2014-12-19
專(zhuān)業(yè): 抗體工程學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
雪中花sml(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-02-06 20:50:36

GC含量這么高，只從退火溫度上做改變的話(huà)，可能不一定好做，建議也是使用Hot start Taq酶擴(kuò)增，配合專(zhuān)用的buffer，效果可能不錯(cuò)，個(gè)人推薦

贊一下

回復(fù)此樓

todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful

7樓2015-02-06 16:06:43

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zshw_001

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 77 (初中生)
金幣: 506.4
帖子: 171
在線(xiàn): 27.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1151714
注冊(cè): 2010-11-20
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

退火溫度太高了吧，試試梯度退火吧。

贊一下

回復(fù)此樓

永遠(yuǎn)相信未知的總是美好的！

8樓2015-02-06 16:31:11

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

linxiqi

新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 5 (幼兒園)
金幣: 12.5
散金: 146
紅花: 6
帖子: 378
在線(xiàn): 70.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2661739
注冊(cè): 2013-09-17
性別: GG
專(zhuān)業(yè): 脈沖功率技術(shù)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

如果不知道引物的退火溫度，我們就采用降落PCR，我們老師都是這么做的。

贊一下

回復(fù)此樓

活在當(dāng)下

9樓2015-02-06 18:12:40

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

maila

10樓2015-02-07 19:42:24

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 求調(diào)劑 +3	圖鑒212 2026-03-30	3/150	2026-03-31 00:31 by jp9609
[考研] 一志愿大連理工大學(xué)材料求調(diào)劑 +4	Gymno 2026-03-30	4/200	2026-03-30 23:07 by ms629
[考研] 288資源與環(huán)境專(zhuān)碩求調(diào)劑，不限專(zhuān)業(yè)，有學(xué)上就行 +11	lllllos 2026-03-30	11/550	2026-03-30 21:19 by 研究僧導(dǎo)導(dǎo)
[考研] 303求調(diào)劑 +7	DLkz1314. 2026-03-30	7/350	2026-03-30 21:07 by peike
[考研] 297求調(diào)劑 +17	田洪有 2026-03-26	18/900	2026-03-30 18:32 by nothing投稿中
[考研] 一志愿南開(kāi)大學(xué)0710生物學(xué)359求調(diào)劑 +5	兔兔兔111223314 2026-03-29	7/350	2026-03-30 18:29 by 兔兔兔111223314
[考研] 0703 化學(xué) 求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué) 342 分 +7	Shern—- 2026-03-28	7/350	2026-03-30 16:31 by nothing投稿中
[考研] 298求調(diào)劑 +3	什么是胖頭魚(yú) 2026-03-30	5/250	2026-03-30 14:41 by 青海小西牛
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +5	hanamiko 2026-03-29	5/250	2026-03-29 16:46 by 學(xué)員8dgXkO
[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專(zhuān)業(yè)都可以 +6	芝士雪baoo 2026-03-28	8/400	2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5	0857求調(diào)劑. 2026-03-24	6/300	2026-03-28 22:04 by zhq0425
[考研] 316求調(diào)劑 +7	江辭666 2026-03-26	7/350	2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 299求調(diào)劑 +7	嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27	7/350	2026-03-28 13:09 by 唐沐兒
[考研] 調(diào)劑 +3	好好讀書(shū)。 2026-03-28	3/150	2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 286求調(diào)劑 +4	丟掉懶惰 2026-03-27	7/350	2026-03-28 08:07 by baoball
[考研] 352分化工與材料 +5	海納百川Ly 2026-03-27	5/250	2026-03-28 03:39 by fmesaito
[考研] 085600，材料與化工321分調(diào)劑 +4	大饞小子 2026-03-27	6/300	2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 調(diào)劑求收留 +7	果然有我 2026-03-26	7/350	2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4	周56 2026-03-24	5/250	2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 347求調(diào)劑 +4	L when 2026-03-25	4/200	2026-03-25 13:37 by cocolv