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一個糾結了我很久很久的問題，層析中的結合與洗脫機制是什么？ 已有2人參與
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糾結了很久很久的層析機制問題，基本上可以概況為目標物和層析介質(zhì)之間的結合作用力是一種什么作用力？為什么在這種條件下兩者能結合，在另外的條件下，兩者又能分開呢？結合和分離的機制是什么？作用力是如何被解除的？。。。 1. ProteinA親和層析中，單抗與ProteinA之間的特異性吸附是一種什么樣的作用力？為什么這樣的作用力可以在洗脫液為低PH時可以被解除，從而單抗被洗脫？ 2. Ni柱親和層析中，HIS與鎳離子之間的作用力又是什么？為什么低鹽的時候，HIS可以被結合，而高鹽的時候，HIS被洗脫？也就是說為什么HIS與鎳離子之間的作用力可以在高鹽環(huán)境中被解除？ 3. 反相層析和疏水相互作用層析的原理都是根據(jù)分子的疏水性，是么，這兩種層析在原理上有什么相同和不同？ |
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【答案】應助回帖
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親和層析是依靠蛋白與相應配體之間的結構互補而產(chǎn)生的分子間作用力，包括了離子鍵、范德華力、疏水力等，而改變PH值之后，可以使得蛋白的結構發(fā)生改變，使得兩者的結構不再互補，比如說在PH=7時，蛋白是球狀，親水基團在外而疏水基團在外，表面帶負電，而柱上偶聯(lián)的抗體表面帶正電，形狀與蛋白能像鎖與鑰匙那樣楔合，而當PH=5時，蛋白的結構發(fā)生改變，變?yōu)閬y麻狀，結構松散疏水基團外露、表面電荷變?yōu)檎姾�，從而與柱上抗體不再結合而被洗脫下來。 在不同濃度的鹽溶液下純合，NI與His也是類似，通過改變鹽濃度來改變蛋白表面電荷狀態(tài)下使之結合和洗脫。 |
4樓2015-03-11 17:26:17
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6樓2015-04-17 16:53:53
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