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一個糾結(jié)了我很久很久的問題，層析中的結(jié)合與洗脫機(jī)制是什么？ 已有2人參與
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糾結(jié)了很久很久的層析機(jī)制問題，基本上可以概況為目標(biāo)物和層析介質(zhì)之間的結(jié)合作用力是一種什么作用力？為什么在這種條件下兩者能結(jié)合，在另外的條件下，兩者又能分開呢？結(jié)合和分離的機(jī)制是什么？作用力是如何被解除的？。。。 1. ProteinA親和層析中，單抗與ProteinA之間的特異性吸附是一種什么樣的作用力？為什么這樣的作用力可以在洗脫液為低PH時可以被解除，從而單抗被洗脫？ 2. Ni柱親和層析中，HIS與鎳離子之間的作用力又是什么？為什么低鹽的時候，HIS可以被結(jié)合，而高鹽的時候，HIS被洗脫？也就是說為什么HIS與鎳離子之間的作用力可以在高鹽環(huán)境中被解除？ 3. 反相層析和疏水相互作用層析的原理都是根據(jù)分子的疏水性，是么，這兩種層析在原理上有什么相同和不同？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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親和層析是依靠蛋白與相應(yīng)配體之間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)而產(chǎn)生的分子間作用力，包括了離子鍵、范德華力、疏水力等，而改變PH值之后，可以使得蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使得兩者的結(jié)構(gòu)不再互補(bǔ)，比如說在PH=7時，蛋白是球狀，親水基團(tuán)在外而疏水基團(tuán)在外，表面帶負(fù)電，而柱上偶聯(lián)的抗體表面帶正電，形狀與蛋白能像鎖與鑰匙那樣楔合，而當(dāng)PH=5時，蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，變?yōu)閬y麻狀，結(jié)構(gòu)松散疏水基團(tuán)外露、表面電荷變?yōu)檎姾�，從而與柱上抗體不再結(jié)合而被洗脫下來。 在不同濃度的鹽溶液下純合，NI與His也是類似，通過改變鹽濃度來改變蛋白表面電荷狀態(tài)下使之結(jié)合和洗脫。 |
4樓2015-03-11 17:26:17
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