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是水貨木蟲(chóng) (著名寫手)
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[求助]
做電鏡的方法 已有4人參與
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求助：我是做蛋白凝膠的，以前做電鏡都是凍干后直接去測(cè)量，現(xiàn)在有文獻(xiàn)報(bào)道說(shuō)做成膠體后，溶于2.5%戊二醛（pBS PH7.2)中1h。然后自來(lái)水沖洗，在采用50%,70%,80%,90%,100%的乙醇中，然后制成干樣。 那么我有以下問(wèn)題想咨詢： 一、我做的是明膠，凝膠性較強(qiáng)，應(yīng)當(dāng)凝膠成什么狀態(tài)為好？譬如濃度是6.67%，那么凝膠多久后合適？因?yàn)槟z時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致測(cè)不出效果。 二、用不同梯度的無(wú)水乙醇洗脫，每個(gè)梯度需要的時(shí)間是多久？ 三、洗脫后有的還沒(méi)有完全干，有文獻(xiàn)報(bào)道說(shuō)是液氮或者干冰下弄干。實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有這個(gè)怎么辦？ 四、如果用冷凍干燥機(jī)抽真空干燥，樣品中含有少量的戊二醛和乙醇，會(huì)發(fā)生危險(xiǎn)嗎？ 曾經(jīng)發(fā)過(guò)e-mail問(wèn)過(guò)這個(gè)領(lǐng)域的大牛，卻沒(méi)得到任何回復(fù)。希望大家給予指點(diǎn)。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
是水貨: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-06-12 13:05:44
是水貨: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-06-12 13:05:44
| 我說(shuō)一下我實(shí)驗(yàn)室肉腸樣品凝膠做SEM的前處理方法，你可以參考以下：將凝膠樣品切成5×5×1mm（長(zhǎng)×寬×高）立方體的薄片（切面盡量光滑平整），放入混合溶液（4%甲醛: 2.5%戊二醛=1:1, v/v）中固定2h；隨后用磷酸鹽緩沖液（0.1mol/L，pH7.2）漂洗6~10次，丙酮（100%）溶液梯度脫水，每次各10min，其中乙醇濃度為30%、50%、70%時(shí)在4℃環(huán)境中進(jìn)行脫水；隨后去除易揮發(fā)的有機(jī)溶劑，然后用真空冷凍干燥機(jī)干燥24h；觀察。 |
10樓2015-06-11 22:28:35
2樓2015-04-25 12:59:09
賴穗0911
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3樓2015-04-26 23:56:12
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7樓2015-04-27 22:21:40
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8樓2015-04-28 12:43:27
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9樓2015-04-28 14:04:50
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