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Ceci818新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
PCR產(chǎn)物與PMD18-T連接不上 已有7人參與
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易錯(cuò)PCR產(chǎn)物回收后與pMD18-T連接，幾乎都長(zhǎng)藍(lán)斑，長(zhǎng)出兩種藍(lán)斑，一種是中間藍(lán)色，邊緣近白色，一種是全部都是藍(lán)色的。連接時(shí)間是過(guò)夜連接，12-16h。有一次連接后長(zhǎng)出藍(lán)白斑，但是挑出的白斑做PCR驗(yàn)證之后都是假陽(yáng)性。求各位大神相助。問(wèn)題出現(xiàn)在哪里？求幫助！ |
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Ceci818
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16樓2015-04-01 10:45:57
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3樓2015-03-30 18:35:00
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4樓2015-03-30 18:38:03
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5樓2015-03-30 18:57:56
【答案】應(yīng)助回帖
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Ceci818(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-03-30 20:54:10
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| 應(yīng)該是你的回收的目的基因濃度過(guò)低，建議你進(jìn)行二次PCR之后回收產(chǎn)物，或者多管回收產(chǎn)物濃縮一下。低濃度產(chǎn)物連接效率很低，延長(zhǎng)連接時(shí)間也沒(méi)用，其實(shí)對(duì)18t來(lái)講，1000bp的片段16度連接2h已經(jīng)100%保險(xiǎn)了，問(wèn)題就是你的產(chǎn)物不好 |
6樓2015-03-30 20:48:54
Ceci818
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7樓2015-03-31 09:36:58
8樓2015-03-31 09:42:07
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10樓2015-03-31 15:04:59
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