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tilamisu2009銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
土壤磷酸酶測(cè)定問(wèn)題求助，急急急 已有1人參與
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最近在做土壤磷酸酶，可是標(biāo)曲做了好幾遍都不行，相關(guān)性很低，測(cè)得的土壤磷酸酶活性數(shù)據(jù)也是浮動(dòng)很大，我測(cè)得是酸性磷酸酶，顯色后是粉紅色，但是做的無(wú)基質(zhì)對(duì)照和空白對(duì)照數(shù)據(jù)跟樣品差不多，說(shuō)明試驗(yàn)很失敗，顯色都是紅色，包括標(biāo)曲都沒(méi)有明顯的變化，求做過(guò)土壤磷酸酶的大神賜教，萬(wàn)分感謝！一下是我的試驗(yàn)方法 土壤磷酸酶（酸性） （一）試劑 1. pH5醋酸鹽緩沖液： A:0.2mol/L 醋酸溶液（11.55ml稀釋至1000ml） B:0.2mol/L醋酸鈉溶液 A液14.8ml+B液35.2ml稀釋至100ml 2. 0.5%磷酸苯二鈉：pH5醋酸緩沖液配制，我在這里加了6.75克磷酸苯二鈉然后溶于緩沖液 3. 氯代二溴對(duì)苯醌亞胺：稱(chēng)取0.125g 2，6-二溴苯醌氯酰亞胺，用10ml 96%乙醇（48ml乙醇+2ml水）溶解，貯存于棕色瓶中，存放在冰箱中，保存的黃色溶液未變褐色之前均可使用。 4. 酚標(biāo)準(zhǔn)溶液：酚原液---取1g苯酚溶于蒸餾水中，定容至1000ml水中，保存于棕色瓶中。酚工作液---取10ml酚原液稀釋至1000ml，每毫升含0.01mg酚 5. 甲苯 6. pH9.4硼酸緩沖液：A液：0.05mol/L硼砂 B液：0.2mol/L氫氧化鈉 A液50ml+B液11ml 稀釋至200ml （二）實(shí)驗(yàn)步驟 1. 標(biāo)線制作 取0，1，3，5，7，9，11，13ml酚工作液，置于50ml比色管中，加入5ml緩沖液（pH9.4硼酸緩沖液）和4滴氯代二溴對(duì)苯醌亞胺試劑，顯色后稀釋至刻度，30min后比色測(cè)定于660nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。 2. 樣品測(cè)定 稱(chēng)取風(fēng)干土樣（過(guò)1mm篩，去除雜質(zhì)）5.00g，放置于三角瓶中，加1ml甲苯，15min后加入20ml 0.5%磷酸苯二鈉，仔細(xì)搖勻后放置于37°C恒溫箱中陪養(yǎng)24h，后培養(yǎng)液中加入50ml蒸餾水離心過(guò)濾。吸取濾液3ml于50ml比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法顯色，并測(cè)定吸光度。 同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)和每一土樣的無(wú)基質(zhì)對(duì)照 （三）數(shù)據(jù)計(jì)算 以24小時(shí)每克土壤中釋放出酚的毫克數(shù)表示 |
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請(qǐng)問(wèn)一下，用這個(gè)方法做磷酸酶時(shí)，無(wú)基質(zhì)對(duì)照是加20毫升的水嗎？還是還要加相應(yīng)的緩沖液？水和緩沖液的量分別加多少？近期做磷酸酶，但就是在這個(gè)問(wèn)題上卡住了 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
8樓2017-08-19 10:48:33
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