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jingxuegood新蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助土壤酸性磷酸酶活性測(cè)定的詳細(xì)方法~~~ 已有4人參與
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| 試驗(yàn)需要測(cè)定土壤酸性磷酸酶活性，想用對(duì)硝基苯磷酸二鈉比色法，但查到的方法不夠詳細(xì)。有的說(shuō)要每個(gè)樣品都要做空白對(duì)照，有點(diǎn)沒(méi)有提及這點(diǎn)；關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定時(shí)加入的試劑也不盡相同，現(xiàn)在很是混亂。望做過(guò)相關(guān)試驗(yàn)的人士給予詳細(xì)方法和相關(guān)指點(diǎn)，非常感謝�。。� |
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土壤磷酸酶（酸性） （一）試劑 1. pH5醋酸鹽緩沖液： A:0.2mol/L 醋酸溶液（11.55ml稀釋至1000ml） B:0.2mol/L醋酸鈉溶液 A液14.8ml+B液35.2ml稀釋至100ml 2. 0.5%磷酸苯二鈉：pH5醋酸緩沖液 3. 氯代二溴對(duì)苯醌亞胺：稱取0.125g 2，6-二溴苯醌氯酰亞胺，用10ml 96%乙醇（48ml乙醇+2ml水）溶解，貯存于棕色瓶中，存放在冰箱中，保存的黃色溶液未變褐色之前均可使用。 4. 酚標(biāo)準(zhǔn)溶液：酚原液---取1g苯酚溶于蒸餾水中，定容至1000ml水中，保存于棕色瓶中。酚工作液---取10ml酚原液稀釋至1000ml水中，每毫升含0.01mg酚 5. 甲苯 6. pH9.4硼酸緩沖液：A液：0.05mol/L硼砂 B液：0.2mol/L氫氧化鈉 A液50ml+B液11ml 稀釋至200ml （二）實(shí)驗(yàn)步驟 1. 標(biāo)線制作 取0，1，3，5，7，9，11，13ml酚工作液，置于50ml比色管中，加入5ml緩沖液（pH9.4硼酸緩沖液）和4滴氯代二溴對(duì)苯醌亞胺試劑，顯色后稀釋至刻度，30min后比色測(cè)定于660nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。 2. 樣品測(cè)定 稱取風(fēng)干土樣（過(guò)1mm篩，去除雜質(zhì)）2.0000g，放置于100ml離心管中，加1ml甲苯，15min后加入20ml 0.5%磷酸苯二鈉，仔細(xì)搖勻后放置于37°C恒溫箱中陪養(yǎng)24h，后培養(yǎng)液中加入50ml蒸餾水離心過(guò)濾。吸取濾液1ml于50ml比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法顯色，并測(cè)定吸光度。 同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)和每一土樣的無(wú)基質(zhì)對(duì)照 （三）數(shù)據(jù)計(jì)算 以24小時(shí)每克土壤中釋放出酚的毫克數(shù)表示 我的方法 |
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jingxuegood4樓2015-01-28 09:12:37
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3樓2015-01-27 20:25:59
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5樓2015-01-29 10:42:55
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6樓2015-01-29 10:45:08
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9樓2015-03-27 10:31:08
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10樓2015-03-27 14:51:25
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