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企鵝帽和茶杯新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于蛋白銀染的問題 已有2人參與
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| 我跑蛋白組分SDS電泳，可能是組分含量太少，第一次用考染基本沒啥條帶，考慮用銀染，固定液是10%的乙酸和50%的乙醇，固定了一夜，結(jié)果縮膠很厲害，是固定液濃度過高的原因嗎？那過夜固定的配比是什么？還有，縮膠用蒸餾水泡著的話能不能還原了？？謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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建議你還是百度一下銀染的protocol吧 銀染是很靈敏的 對于時間的掌握更是非常之重要 沒聽說過做銀染固定一夜的 一般是固定半小時 這里給你一個我的參考步驟 Solutions for Silver Stain 1. 固定劑：雙蒸水：乙醇：乙酸 250：200:50 固定30min 2. 敏化液：無水乙酸鈉5.1g 硫代硫酸鈉0.15g 去離子水52.5ml 無水乙醇22.5ml 敏化35min后水洗三遍每次5min 3. 銀染液：0.1875g硝酸銀 去離子水75ml 銀染20min后水洗兩遍每次3min 4. 顯色液：1.875g無水碳酸鈉 去離子水75ml 臨用前加入30ul甲醛 顯色至條帶清晰后立即終止 5．終止液：1gEDTA溶于75ml去離子水 終止液孵育10min后將終止液換成水即可保存一周左右的時間 |
2樓2015-04-24 10:33:48
3樓2015-04-24 21:34:55
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