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pumpkin236鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于蛋白質(zhì)銀染的問(wèn)題請(qǐng)教
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最近做了銀染 結(jié)果不好 有沒(méi)有懂的朋友幫忙看下 怎么改進(jìn) 讓結(jié)果更清楚 下面是染色結(jié)果：發(fā)現(xiàn)最后顯色的時(shí)候 上部分高分子量蛋白質(zhì)很密集 一下子條帶就很深 下面小分子很淺 等下面部分小分子量條帶出來(lái)了以后吧 上面顏色深的看不見(jiàn)了 不知道怎么改進(jìn) 左邊兩個(gè)條帶是marker，接著兩個(gè)是銀染的marker（條帶不知道為什么沒(méi)有顯示出來(lái)），接著是樣品，膠用的10%，用的pierce的銀染kit。 懂的朋友希望給一些改進(jìn)意見(jiàn)。 DSC_0468.jpg(1.81MB) http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DdoOiRTuUAQA7fb?p=130497 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 回帖置頂 2013-01-10 20:29:04
amisking: 金幣+3, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2013-01-10 20:29:16
pumpkin236: 金幣+2 2013-01-11 01:19:06
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pumpkin236: 金幣+2 2013-01-11 01:19:06
| 感覺(jué)你的樣品沒(méi)有制好似的。泳道內(nèi)有縱向拖尾。洗玻璃板時(shí)最后要用mili-q潤(rùn)洗。不知道你做的什么樣品，是否在小分子量區(qū)的蛋白比較少。一般的樣品也有這種趨勢(shì)，蛋白在一定分子量區(qū)會(huì)比較密集。如果想讓膠上下均勻一點(diǎn)，可以做梯度膠試試。此外，銀染很靈敏，不知道你的上樣量是多少ug蛋白，跑的是多大的膠。沒(méi)有用kit銀染過(guò)，不知道是不是kit的問(wèn)題。說(shuō)實(shí)話啊，我不喜歡pierce的東西。 |
3樓2013-01-10 11:18:23
zhang881007
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我又用這個(gè)樣品重復(fù)了一次，縱向拖尾特別嚴(yán)重，w也感覺(jué)樣品處理的不好。你能告訴我詳細(xì)的樣品處理的方法么？ 我先說(shuō)下 平時(shí)怎么處理的： 1 離心收集細(xì)胞（收集前會(huì)用pbs洗一次） 2 加裂解夜（sigma），我是纖維細(xì)胞，所以10cm 皿的細(xì)胞我一般只加50-80ul的裂解夜，怕加多了蛋白濃度低，但是每次濃度也只有1-2ug／ul。裂解15min，然后13000g 15min 離心 3 收集上清，上清中加入上樣緩沖液和2-巰基乙醇。比列是65%：25%：10% 4 90 度 5min 我需要加上樣buffer的時(shí)候再加1%sds否，我感覺(jué)樣品沒(méi)溶解好 謝謝 |
6樓2013-01-12 00:56:09
cicelyzh
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7樓2013-01-12 06:34:53
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