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hello啊c新蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于cas9敲除的問題
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cas9靶位點可以設(shè)計成21個堿基嗎,我們實驗室準備用T7啟動子,5‘端兩個G,3’端結(jié)束后是NGG?戳司W(wǎng)上和文獻上大部分靶位點都是設(shè)計成20個堿基,但是也有說19到23個堿基都可以。20個堿基實在找不到靶點了,21個堿基的靶點還能找到一個,不知道能不能用。 大家對cas9有什么看法和經(jīng)驗都可以交流一下,據(jù)說脫靶效應(yīng)很嚴重啊 |
新蟲 (初入文壇)
木蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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問題1:gRNA長度18-22吧,大致范圍,有專門文獻的,你看一下。這東西類似引物,沒必要非得20。至于為什么文獻大都是20bp,是因為最開始在釀膿桿菌發(fā)現(xiàn)的是20個,最早發(fā)現(xiàn)所以最多使用而已,你完全可以改變長度的。有的網(wǎng)站設(shè)計的可以不是20.第二個問題:G可加可不加,張峰實驗室推薦加,因為真核細胞啟動子轉(zhuǎn)錄起始位點為G,但是很多實驗發(fā)現(xiàn)不加或開頭不是G不影響打靶效率。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

銅蟲 (初入文壇)
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