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hello啊c新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于cas9敲除的問(wèn)題
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cas9靶位點(diǎn)可以設(shè)計(jì)成21個(gè)堿基嗎，我們實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備用T7啟動(dòng)子，5‘端兩個(gè)G，3’端結(jié)束后是NGG。看了網(wǎng)上和文獻(xiàn)上大部分靶位點(diǎn)都是設(shè)計(jì)成20個(gè)堿基，但是也有說(shuō)19到23個(gè)堿基都可以。20個(gè)堿基實(shí)在找不到靶點(diǎn)了，21個(gè)堿基的靶點(diǎn)還能找到一個(gè)，不知道能不能用。 大家對(duì)cas9有什么看法和經(jīng)驗(yàn)都可以交流一下，據(jù)說(shuō)脫靶效應(yīng)很?chē)?yán)重啊 |
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菲瓏悅兒
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2樓2015-06-03 16:23:30
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3樓2016-04-10 10:40:41
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問(wèn)題1:gRNA長(zhǎng)度18-22吧，大致范圍，有專(zhuān)門(mén)文獻(xiàn)的，你看一下。這東西類(lèi)似引物，沒(méi)必要非得20。至于為什么文獻(xiàn)大都是20bp，是因?yàn)樽铋_(kāi)始在釀膿桿菌發(fā)現(xiàn)的是20個(gè)，最早發(fā)現(xiàn)所以最多使用而已，你完全可以改變長(zhǎng)度的。有的網(wǎng)站設(shè)計(jì)的可以不是20.第二個(gè)問(wèn)題：G可加可不加，張峰實(shí)驗(yàn)室推薦加，因?yàn)檎婧思?xì)胞啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為G，但是很多實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不加或開(kāi)頭不是G不影響打靶效率。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
4樓2016-04-27 04:06:09
Simon_ird
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5樓2016-04-27 06:32:57
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