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[求助]
各位，最近剛剛接觸綠色熒光蛋白GFP，熟悉GFP蛋白的大神們，請(qǐng)求幫助。 已有3人參與
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看到了關(guān)于GFP蛋白的各種應(yīng)用，我想用它來(lái)做基因表達(dá)的定位，大概的思路是這樣子的，請(qǐng)大家指教。 從NCBI上面查取GFP序列，用加有合適酶切位點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段，連接到質(zhì)粒，再連上自己要定位的基因，化轉(zhuǎn)到酵母。 目前大致是這么想的，請(qǐng)問(wèn)這種做法可取嗎？GFP基因的模板從哪里買的到？拜托大家了  |
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3樓2015-05-09 07:56:39
8樓2015-05-09 21:27:49
2樓2015-05-08 22:40:06
4樓2015-05-09 11:07:04
5樓2015-05-09 11:07:18
jacobbai
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6樓2015-05-09 11:15:26
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zeroon
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【答案】應(yīng)助回帖
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個(gè)人覺(jué)得樓主得確定這個(gè)GFP在酵母里是否能直接使用，就是說(shuō)密碼子優(yōu)化過(guò)沒(méi)有。當(dāng)然，在酵母中用的GPF很常見(jiàn)，ncbi上的序列帶的參考文獻(xiàn)也會(huì)提到該序列是否在酵母中應(yīng)用的。 另外，細(xì)胞內(nèi)某基因的定位，我估計(jì)樓主的意識(shí)是該基因編碼的蛋白的定位吧？如果是這個(gè)，那么很明顯，樓主需要把gfp直接連接在那個(gè)基因后，而不是單獨(dú)加啟動(dòng)子。不然的話，你的gpf單獨(dú)表達(dá)了，怎么能定位要做的那個(gè)基因的蛋白呢？ |
10樓2015-05-12 18:50:45
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