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jordanlau鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助qPCR實驗問題，請高人指教or討論~謝謝 已有3人參與
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本人實驗欲比較2種細胞 4種處理（3實驗組1對照組） 18個基因（含1個內(nèi)參） 的相對變化，算上每個樣品的三個重復，簡而言之就是檢測 2種細胞 12個樣品的18個基因相對變化，實驗室儀器是ABI 48孔的儀器，現(xiàn)在請教各位高手如何安排檢測樣品的擺放？ 如下方案： 1、每次檢測所有樣品的同一個基因（24個樣品，準備第一次A基因16樣品，第二次B基因16樣品，第三次做A、B基因剩下的8樣品） 2、每次檢測一個樣品的所有基因（18個基因還得分兩次，先做16個，把9個樣品的最后2個基因一起做） 以上方案并非每次反應都有內(nèi)參，是否妥當？ 如果不妥，則如下方案： 3、每次檢測都有內(nèi)參，一次檢測8個樣品的同一個基因（做54次PCR！） 4、每次檢測都有內(nèi)參，一次檢測1個樣品的15個基因（剩下2個基因最后一起做） 實驗室前輩建議用第1種方案，但是就是不知道這樣做的誤差能否容忍。 做了如下對比，同一樣品，同樣參數(shù)，測ACTB，上午下午跑的Ct值都不一樣，有的差距大于2，當然，這里面誤差可以是機器原因，也有可能是槍頭、加樣，人為等系統(tǒng)誤差 不過，另一方面想，考慮這個問題的原因主要是機器誤差，誤差變化方向應該是一致的，做相對定量的話，這個問題貌似又可以忽略。 請各位高手不吝賜教，謝謝！ |
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jordanlau
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5樓2015-12-24 22:42:25
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