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jordanlau鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助qPCR實(shí)驗(yàn)問(wèn)題，請(qǐng)高人指教or討論~謝謝 已有3人參與
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本人實(shí)驗(yàn)欲比較2種細(xì)胞 4種處理（3實(shí)驗(yàn)組1對(duì)照組） 18個(gè)基因（含1個(gè)內(nèi)參） 的相對(duì)變化，算上每個(gè)樣品的三個(gè)重復(fù)，簡(jiǎn)而言之就是檢測(cè) 2種細(xì)胞 12個(gè)樣品的18個(gè)基因相對(duì)變化，實(shí)驗(yàn)室儀器是ABI 48孔的儀器，現(xiàn)在請(qǐng)教各位高手如何安排檢測(cè)樣品的擺放？ 如下方案： 1、每次檢測(cè)所有樣品的同一個(gè)基因（24個(gè)樣品，準(zhǔn)備第一次A基因16樣品，第二次B基因16樣品，第三次做A、B基因剩下的8樣品） 2、每次檢測(cè)一個(gè)樣品的所有基因（18個(gè)基因還得分兩次，先做16個(gè)，把9個(gè)樣品的最后2個(gè)基因一起做） 以上方案并非每次反應(yīng)都有內(nèi)參，是否妥當(dāng)？ 如果不妥，則如下方案： 3、每次檢測(cè)都有內(nèi)參，一次檢測(cè)8個(gè)樣品的同一個(gè)基因（做54次PCR�。� 4、每次檢測(cè)都有內(nèi)參，一次檢測(cè)1個(gè)樣品的15個(gè)基因（剩下2個(gè)基因最后一起做） 實(shí)驗(yàn)室前輩建議用第1種方案，但是就是不知道這樣做的誤差能否容忍。 做了如下對(duì)比，同一樣品，同樣參數(shù)，測(cè)ACTB，上午下午跑的Ct值都不一樣，有的差距大于2，當(dāng)然，這里面誤差可以是機(jī)器原因，也有可能是槍頭、加樣，人為等系統(tǒng)誤差 不過(guò)，另一方面想，考慮這個(gè)問(wèn)題的原因主要是機(jī)器誤差，誤差變化方向應(yīng)該是一致的，做相對(duì)定量的話(huà)，這個(gè)問(wèn)題貌似又可以忽略。 請(qǐng)各位高手不吝賜教，謝謝！ |
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jordanlau
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2015-12-24 22:42:25
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