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求各位前輩幫幫忙吧，快瘋了。。。 已有9人參與
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我做的是真菌基因組ＤＮＡ提取，做了好久，電泳才好歹有了個結(jié)果（圖１最右邊一個），ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００，也不知道這是不是ＤＮＡ。然后又做ＰＣＲ，就是做不出東西，ＰＣＲ的原材料都是去年老師買的，學(xué)姐用過的，據(jù)說什么都沒做出來。 �。校茫铱傮w系為５０微，包括 10×擴增緩沖液 �。祏l • dNTP混合物 �。眜l • 引物 （１００ｕＭ） 各２ul • 模板DNA １．５ul • Taq DNA聚合酶 （５Ｕ／ul） �。埃磚l • ２５ｍＭ Mg2+ �。硊l • 加雙蒸水至 �。担皍l 反應(yīng)程序如下：９４℃ ３ｍｉｎ， ９４℃�。保恚椋�， 起始退火溫度４８℃�。保恚椋睿� �。罚病妗。常恚椋�， �。常皞�循環(huán)后７２℃�。保埃恚椋�， 模板用的圖１最右邊的樣品，引物是ＮＳ１和ＮＳ８，因為計算這兩個引物ＴＭ值相差比較大，一個４９℃，一個５９℃，相差有１０度，所以每循環(huán)退火溫度升高０．４℃（這是叫ｔｏｕｃｈ－ｄｏｗｎ�。校茫覇�？），結(jié)果就做出了圖２的樣子，全是引物二聚體了？ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００。 我只有六個金幣，跪求各位前輩幫幫忙啊，小弟感激不盡�。�！ 圖１.JPG 圖２.jpg |
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