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求各位前輩幫幫忙吧，快瘋了。。。 已有9人參與
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我做的是真菌基因組ＤＮＡ提取，做了好久，電泳才好歹有了個(gè)結(jié)果（圖１最右邊一個(gè)），ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００，也不知道這是不是ＤＮＡ。然后又做ＰＣＲ，就是做不出東西，ＰＣＲ的原材料都是去年老師買的，學(xué)姐用過(guò)的，據(jù)說(shuō)什么都沒(méi)做出來(lái)。 ＰＣＲ總體系為５０微，包括 10×擴(kuò)增緩沖液 �。祏l • dNTP混合物 �。眜l • 引物 （１００ｕＭ） 各２ul • 模板DNA �。保祏l • Taq DNA聚合酶 （５Ｕ／ul） ０．４ul • ２５ｍＭ Mg2+ �。硊l • 加雙蒸水至 �。担皍l 反應(yīng)程序如下：９４℃ ３ｍｉｎ， �。梗础妗。保恚椋�， 起始退火溫度４８℃�。保恚椋睿� �。罚病妗。常恚椋睿� �。常皞�(gè)循環(huán)后７２℃ １０ｍｉｎ， 模板用的圖１最右邊的樣品，引物是ＮＳ１和ＮＳ８，因?yàn)橛?jì)算這兩個(gè)引物ＴＭ值相差比較大，一個(gè)４９℃，一個(gè)５９℃，相差有１０度，所以每循環(huán)退火溫度升高０．４℃（這是叫ｔｏｕｃｈ－ｄｏｗｎ�。校茫覇幔浚�，結(jié)果就做出了圖２的樣子，全是引物二聚體了？ｍａｒｋｅｒ用的Ｄ２０００。 我只有六個(gè)金幣，跪求各位前輩幫幫忙啊，小弟感激不盡�。�！ 圖１.JPG 圖２.jpg |
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3樓2015-05-26 00:26:41
xueyuxx
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2樓2015-05-25 22:16:24
4樓2015-05-26 08:41:17
xiaoyangren7
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-26 23:02:23
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-26 23:02:23
| 沒(méi)做過(guò)真菌，首先提取的DNA做凝膠電泳，要確定是你需要大小的基因組，PCR時(shí)應(yīng)該做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組，一般是保守序列，如果陽(yáng)性對(duì)照P的出，說(shuō)明模板沒(méi)有問(wèn)題。PCR最不出很多原因，我之前有時(shí)退火溫度相差4度就做不出，可以設(shè)溫度梯度PCR |
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5樓2015-05-26 09:32:22
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