 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 9213 | 回復: 5 | |||
[交流]
詳解你不了解的泛素化，有圖有實例哦�。。�！ 已有5人參與
|
|
蛋白質翻譯后修飾在生命體中具有十分重要的作用，它使蛋白質的結構更為復雜，功能更為完善，調節(jié)更為精細，作用更為轉移。常見的蛋白質翻譯后修飾過程有泛素化、磷酸化、乙�；�、糖基化等，同時還有一些特殊的翻譯后修飾如甲基化、巴豆酰化、戊二�；；�，琥珀酰化等在生物過程中起到重要的作用。 而今天小編想和大家共享的是關于泛素化研究，一直以來，人們都忽視了蛋白質水解酶參與細胞功能的調控，泛素和與其相關的蛋白水解酶的發(fā)現(xiàn)，給整個科學界帶來了**性的影響。泛素由76個氨基酸組成，高度保守，普遍存在于真核細胞內，故名泛素。泛素化是可逆的，依賴ATP并且通過泛素激活酶E1，泛素結合酶E2，泛素連接酶E3一系列催化反應所致。 具體過程為首先在ATP(紅色所示)供能的情況下酶E1(蛋白質編號1r4n)粘附在泛素分子尾部(淡黃色所示)的Cys殘基上(綠色所示,注意在這個結構中,Cys突變?yōu)锳la)激活泛素,接著,E1將激活的泛素分子轉移到E2酶上(蛋白質編號1fxt),隨后,E2酶和一些種類不同的E3酶共同識別靶蛋白,對其進行泛素化修飾。根據(jù)E3與靶蛋白的相對比例可以將靶蛋白單泛素化修飾和多聚泛素化修飾。E3酶(蛋白質編號1ldk和1fqv)的外形就像一個夾子,靶蛋白連接在中間的空隙內(星號所示)。酶的左側結構域決定靶蛋白的特異性識別,右側結構域定位E2酶以轉移泛素分子。 泛素化可以生產出單泛素化或多泛素化蛋白質。后者在當7個賴氨酸殘基的泛素與另一個泛素的甘氨酸C端連接形成。這種泛素分子鏈接在生物過程中起到重要的作用。共價結合泛素的蛋白質能被蛋白酶識別并降解，這是細胞內短壽命蛋白質和一些異常蛋白降解的普遍途徑。泛素化及類泛素化蛋白在細胞分裂，自噬，DNA修復，免疫應答，細胞消亡等方面同樣起到關鍵作用。與消化道內進行的蛋白質水解不同，從泛素與蛋白的結合到將蛋白水解成小的肽段，整個水解過程需要能量參與。人們開始意識到泛素-蛋白酶系統(tǒng)是一個對于真核細胞非常重要的調節(jié)系統(tǒng)。 1、泛素化實驗方案 （1）利用可以純化泛素化底物的抗體（PTM-1101）富集并利用高通量質譜檢測，該方案具有高靈敏度及高特異性。 （2）His-taggedubiquitin:該方案具有高特異性，但在有些生物樣本中面臨挑戰(zhàn)，如動物組織及臨床樣本。因為泛素化發(fā)生在個體分子中不同位點不同水平上，往往會導致富集出的蛋白在酶解后產生大量非修飾肽段影響結果鑒定。 2、泛素化研究挑戰(zhàn)和解決方案 1）挑戰(zhàn) 運用質譜檢測泛素化會發(fā)生很多假陽性結果，所以在實驗中需要非常小心的驗證。雖然泛素化質量偏移114.043 Da在質譜中可以精確檢測出，但是還有其他的一些情況也會導致114Da的質量偏移結果干擾鑒定結果。具體狀況如下。 （1） 天冬酰胺但單同位素殘基質量分數(shù)為114.043Da； （2） 在蛋白酶解過程中普遍運用碘乙酰胺（IAM）對肽段進行碘乙�；磻�，而此時半胱氨酸及賴氨酸（有時）上會發(fā)生碘乙�；揎椩黾�57.021Da分子量； （3） 其他氨基酸影響，亮氨酸與異亮氨酸單同位素質量分數(shù)為113.084Da以及他們m+1同位素質量分數(shù)為114 Da。 2）解決方案 （1）改變烷基化試劑或者調整烷基化孵化溫度； （2）設置更高的質量準確度閾值及手動或軟件驗證的單一同位素質量。 3、實例分享 Scientific Reports: SAHA在蛋白質組、泛素化組及乙酰化組中的神奇關聯(lián) 來自安徽省立醫(yī)院，安徽醫(yī)科大學及杭州景杰生物科技有限公司的研究人員在SAHA（SuberoylanilideHydroxamic Acid）治療非小細胞肺癌（A549Cell Line)機制研究中取得重大突破，發(fā)現(xiàn)經過SAHA刺激治療后的非小細胞肺癌A549細胞系在蛋白質組，泛素化修飾組及乙�；揎椊M之間有著密切的crosstalk。本研究內容發(fā)表在2015年3月31日的ScientificReports雜志上。 組蛋白去乙�；福℉DACs）作為重要的癌癥診斷標志物被人們熟知，而SAHA作為組蛋白去乙酰化酶抑制劑對CTCL（cutaneousT-cell lymphomas）癌癥診療試劑首個被FDA認證的。該藥對非小細胞肺癌,乳房癌以及子宮癌都有較好的療效。在之前的研究中已經證實SAHA對癌細胞的蛋白質組及乙�；揎椊M有著明顯的影響，而是否還有別的修飾類型對其產生影響，修飾之間有無新的crosstalk還待深入研究。 在本研究中研究人員基于SILAC（stableisotope labeling by amino acids）標記，PTM-Biolabs生產的抗體富集及高分辨率液相質譜定量技術對SAHA處理前后的A549細胞進行蛋白質組，泛素化組及乙酰化組進行分析。其中蛋白質組共鑒定到4302個蛋白質，其中2968個蛋白被定量。在生物學分析中上調蛋白大多集中在線粒體及內質網中，而下調的蛋白則集中在細胞核，染色質，核糖體，剪接體混合物及轉錄抑制因子混合物中，這說明SAHA的治療抑制了細胞轉錄。進一步通過該策略研究泛素化組，科學家們鑒定到613個蛋白質，1067個泛素化位點，其中586個蛋白質1012個泛素化位點被定量。而大多數(shù)泛素化修飾的蛋白都集中在細胞膜上，這說明泛素化在細胞膜上扮演了重要的角色。乙酰化組鑒定到551個蛋白質，1124個乙�；稽c，其中542個蛋白質1099個乙酰化位點被定量。同時在組蛋白層面鑒定到91個乙酰化位點，這是現(xiàn)在全球最大的SAHA處理A549細胞的乙�；M數(shù)據(jù)庫。而這些上調的乙�；鞍缀娃D錄有著很大的關聯(lián)。 通過對蛋白表達水平分析科學家們發(fā)現(xiàn)蛋白質組與泛素化組呈現(xiàn)負相關，這也與泛素化導致蛋白質降解功能是相關的。而在對泛素化組與乙�；M關聯(lián)性分析上科學家們發(fā)現(xiàn)在SAHA治療后呈現(xiàn)正相關性。非組蛋白的乙�；头核鼗霓D錄因子可以通過轉錄組影響蛋白質組水平，而組蛋白的乙�；赡芡ㄟ^表觀遺傳學影響蛋白質組學水平。 該研究首次在SAHA治療非小細胞肺癌中發(fā)現(xiàn)了泛素化修飾，并深度分析了該修飾生物學作用，讓蛋白質翻譯后修飾與蛋白質表達水平的相關性研究為今后該領域的研究起到了指導的作用。更為重要的是蛋白質組，泛素化組及乙�；Mcrosstalk的研究對于擴展我們對SAHA治療肺小細胞癌的治療有了更為深刻的了解，為后期對該領域的機制研究提供了方向。 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubm ... d+Acetylome+in+Non- |
回復此樓» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺，不對該內容負責。
本內容由用戶自主發(fā)布，如果其內容涉及到知識產權問題，其責任在于用戶本人，如對版權有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 2015.03--Scientific_reports--Suberoylanilide_Hydroxamic_Acid_Treatment_Reveals_Crosstalks_among_Proteome,_Ubiquitylome_and_Acetylome_in_Non-Small_Cell_Lung_Cancer_A549_Cell_Line.pdf
2015-05-28 16:15:40, 2.62 M
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
acehanhan» 猜你喜歡
271材料工程求調劑
已經有6人回復
-
材料專碩274一志愿陜西師范大學求調劑
已經有8人回復
-
288求調劑
已經有9人回復
-
一志愿武漢理工材料工程專碩調劑
已經有4人回復
-
085601材料工程專碩求調劑
已經有10人回復
-
321求調劑
已經有8人回復
-
一志愿北京化工大學0703化學318分，有科研經歷，求調劑
已經有3人回復
-
307求調劑
已經有6人回復
-
266求調劑
已經有10人回復
-
本人考085602 化學工程 專碩
已經有19人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
2樓2015-06-01 11:37:29
3樓2015-06-17 10:33:35
acehanhan
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 1870.3
- 散金: 60
- 帖子: 67
- 在線: 39.2小時
- 蟲號: 1057477
- 注冊: 2010-07-14
- 專業(yè): 生物化學
4樓2015-11-05 11:40:55
onion77
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 160.3
- 散金: 28
- 帖子: 122
- 在線: 7.9小時
- 蟲號: 216102
- 注冊: 2006-03-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
5樓2015-11-05 17:28:32
| 感謝分享！ |
6樓2017-01-16 18:26:41
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 fc3110813 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 288求調劑 +9 | 于海海海海 2026-03-19 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 307求調劑 +6 | 冷笙123 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 本人考085602 化學工程 專碩 +17 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 0703化學調劑 +3 | 18889395102 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調劑，英語六級551，有科研經歷 +4 | 生物工程調劑 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料080500調劑求收留 +4 | 一顆meteor 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料學碩321求調劑 +6 | Ymlll 2026-03-18 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調劑（0854都可以） +3 | xbxudjdn 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 0854，計算機類招收調劑
+3
|
胡辣湯放糖 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 280求調劑 +6 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 302求調劑 +4 | 小賈同學123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 278求調劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 東南大學364求調劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請]
今年的國基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 復試調劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請求調劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|