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酵母做電轉(zhuǎn)時(shí)點(diǎn)轉(zhuǎn)杯大小有關(guān)系嗎 已有1人參與
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| 最近在做酵母電轉(zhuǎn)化，實(shí)驗(yàn)室只有0.4mm點(diǎn)轉(zhuǎn)杯，想問(wèn)一下需要用多少感受態(tài)和線性化后的質(zhì)粒呢？ |
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guoqin_shiyin
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2樓2015-06-08 19:15:19
3樓2015-06-08 21:09:58
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4樓2015-06-08 21:17:52
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1. 0.4mm杯子在相同條件下提供的場(chǎng)強(qiáng)比0.2mm的低一些，更適合大一些的哺乳細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，酵母也能轉(zhuǎn)，但是不一定能達(dá)到滿板轉(zhuǎn)化子的效果。如果后期有篩多拷貝要求的話，最好提高電壓或者換0.2mm的杯子。 2.感受態(tài)按現(xiàn)成的protocol來(lái)做，只要保證初始擴(kuò)培的時(shí)候酵母OD在1.0—1.2這個(gè)菌體濃度，后期不需要太過(guò)關(guān)注感受態(tài)濃度。 3.DNA最好在5ug—10ug這個(gè)程度。體積10ul左右添加到100ul左右感受態(tài)里直接加到電極杯中就可以轉(zhuǎn)化了。 |
5樓2015-06-09 00:27:43
6樓2015-06-09 16:06:57
7樓2015-06-09 16:08:07
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8樓2015-06-09 18:01:15
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9樓2015-06-09 20:27:38
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10樓2015-06-09 20:28:44
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