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ynbymx新蟲 (初入文壇)
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UCNP修飾DNA一直不成功
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最近一直嘗試在PAA-UCNP上修飾NH2-DNA,可是一直沒有成功。主要參考了武大Wang等人的Aptamer biosensor based on fluorescence resonance energy transfer from upconverting phosphors to carbon nanoparticles for thrombin detection in human plasma[J]. Analytical chemistry, 2011, 83(21): 8130-8137.我的主要步驟如下: 1.5mg PAA-UCNP分散在2mLMES(10mM,PH5.5) 2.加入EDC ·HCl 0.8mg(2mM),NHS1.2mg(5mM),30℃緩慢振蕩30min; 3.離心(這一步水洗和未水洗都嘗試過) 4.分散在2mL 含2.5μM NH2-DNA的HEPES buffer(10mM,PH7.2); 5.30℃,反應(yīng)過夜; 6.離心,HEPES洗滌3次,最后分散在2mL Tris-HCl(10mM,PH7.4) 然后作紫外表征,在260nm附近看不到峰,上層液260nm仍有很強(qiáng)的DNA峰(和未修飾前一樣)。 有么有做過類似的,希望可以給點(diǎn)建議,謝謝! |
新蟲 (初入文壇)
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