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酶連 已有3人參與
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請(qǐng)教各位 我最近在用TAKARA的T4 DNA連接酶做載體(6.5kb)和目的片段(0.5kb)的連接,但是翻看了一下說(shuō)明書(shū),沒(méi)有推薦反應(yīng)體系,不知道怎樣的配比才能提高連接效率,請(qǐng)各位指點(diǎn)迷津,另外大家都在用什么反應(yīng)條件,我看有37℃,16℃和4℃,哪個(gè)方法高效快捷呢?謝謝 |
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

銅蟲(chóng) (初入文壇)
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我個(gè)人常用的連接體系如下: 目的片段酶切產(chǎn)物 6微升 質(zhì)粒載體酶切產(chǎn)物 2微升 ddH2O 4微升 T4 連接酶10X Buffer 1.5微升 T4 連接酶 1.5微升 其中可根據(jù)測(cè)的目的片段和質(zhì)粒載體酶切產(chǎn)物的濃度調(diào)整摩爾體積,總比例為載體:目的片段=1:3~1:9,和樓上推薦的基本沒(méi)差,其余用水補(bǔ)全,共計(jì)15微升體系,16℃水浴連接過(guò)夜,望采納。 |
新蟲(chóng) (初入文壇)
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