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小肉團(tuán)子金蟲 (小有名氣)
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[求助]
MTT測(cè)細(xì)胞增殖應(yīng)該選用幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)？CCK-8呢？表征改性后鈦表面的生物相容性。 已有7人參與
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我是做鈦表面改性的，現(xiàn)在想表征其生物相容性，準(zhǔn)備做細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，但是不知道該選用哪一種�，F(xiàn)有兩種：MTT和CCK-8，但是很多疑問： 1、關(guān)于方法選擇：CCK-8方法比較便捷、靈敏，但是為什么現(xiàn)有的做生物材料的文獻(xiàn)中很少有用CCK-8的，是因?yàn)镃CK-8不同時(shí)間長度的不能比較嗎？ 2、關(guān)于時(shí)間點(diǎn)選擇：文獻(xiàn)中做MTT的，有用1個(gè),2個(gè)還有3-5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的，這個(gè)應(yīng)該怎么選擇呢？ 如果用CCK-8又需要做幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)呢？ 3、無論哪種方法，一般需要重復(fù)幾次數(shù)據(jù)才算有效呢？ 本人學(xué)材料的，對(duì)生物方面了解甚少，最近因?yàn)檫@些問題很苦惱  ，又比較著急知道，查了很多查不到答案，還請(qǐng)各位前輩蟲友們賜教！真得很感謝！！  |
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xingxin02
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第一點(diǎn)，如樓上所說MTT比較經(jīng)典，便宜，不過CCK-8也不是很貴（相對(duì)于動(dòng)輒兩三千塊的抗體來說），CCK-8價(jià)格是幾百塊吧，CCK-8操作簡單，不需要溶解這一步，而且染色后更換培養(yǎng)基，細(xì)胞可以繼續(xù)養(yǎng)。 第二點(diǎn)，無論是MTT還是CCK-8，做細(xì)胞的增殖實(shí)驗(yàn)（或是生長曲線），肯定是需要檢測(cè)多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的，比如1天，3天，5天，7天。一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的，那可能是細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，比如說不同濃度藥物對(duì)細(xì)胞毒性的影響，加入不同濃度的藥物，培養(yǎng)24h（根據(jù)藥物情況，一般24h或者48h）。 第三點(diǎn)，每個(gè)孔至少有三個(gè)副孔。 |
3樓2015-06-12 14:47:47
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問題1，CCK-8的原理跟MTT相似，不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機(jī)溶劑溶解這個(gè)步驟，因此可以減少一定的誤差。其他優(yōu)點(diǎn)就是重復(fù)性優(yōu)于MTT；對(duì)細(xì)胞毒性小。但是CCK-8比MTT的價(jià)格要貴不少，所以一般來說，還是MTT法用的多。 問題2，沒有明白你說的時(shí)間點(diǎn)是什么，是測(cè)量周期么？這個(gè)應(yīng)該和你選擇的細(xì)胞有關(guān) 問題3，材料一般要做3個(gè)重復(fù)樣，每個(gè)重復(fù)樣還要做3個(gè)MTT或者CCK-8 希望可以幫到你 |
2樓2015-06-12 06:19:26
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我也是做鈦材表面修飾的，我建議用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性，比MTT好，也不是很貴，效果好。時(shí)間點(diǎn)一般選擇的是1,3,5,7，11天就可以了，也有2,4，6，8天，具體的要看你的細(xì)胞的增值曲線是什么樣的，以及你用的是什么細(xì)胞。我們一般要重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，每次設(shè)置的平行組有5個(gè)，5個(gè)數(shù)值之間取平均數(shù)。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
5樓2015-06-14 16:42:59
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1、我們以前用的MTT，后來用的CCK-8比較多。相對(duì)來說，CCK-8更加靈敏，更加便捷，但是價(jià)格稍微貴點(diǎn) 2、時(shí)間點(diǎn)是根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)安排的，最好看看相關(guān)的參考文獻(xiàn)。一般有1天、4天、7天，或者7天、14天。 3、平行樣本的話當(dāng)然越多越好，但是為了實(shí)驗(yàn)簡便和科學(xué)需要，一般至少做3個(gè)，我們一般做5-6個(gè)，減少誤差。 |
4樓2015-06-14 11:16:13
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10樓2015-09-08 16:08:53
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