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lxiaxia0519新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
雙抗夾心法梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)變化，求大家?guī)兔Ψ治鲈? 已有3人參與
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最近做雙抗體夾心，一抗通過(guò)戊二醛交聯(lián)在二氧化硅基質(zhì)上，二抗用熒光素標(biāo)記。配置一系列標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度，7.8ng/mL--780ng/mL,結(jié)果無(wú)梯度變化，和空白值（不加抗原，直接加二抗）接近，根據(jù)此實(shí)驗(yàn)，能否說(shuō)明抗原抗體之間結(jié)合不上？值得一提的是，今年2月份使用該方法時(shí)，結(jié)果是正常的，已經(jīng)做出了抗原的濃度線性曲線，從3月份開(kāi)始響應(yīng)信號(hào)就沒(méi)有梯度變化了，從同一家公司又買了一批新的抗原，用了幾天就又測(cè)不到信號(hào)了。聯(lián)系抗原公司后，那邊又給發(fā)了新的一抗、抗原、二抗，還是測(cè)不到信號(hào)�？乖贵w都是按說(shuō)明書上的條件保存的，也沒(méi)有反復(fù)凍融。于是又從別的公司買了一份抗原（固體的），結(jié)果依然無(wú)梯度變化。 2個(gè)月來(lái)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有一點(diǎn)進(jìn)展，都快抑郁了，跪求各位前輩幫幫忙給點(diǎn)意見(jiàn)吧！ |
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lxiaxia0519
新蟲(chóng) (小有名氣)
| oo |
2樓2015-06-15 10:58:58
飄逸的云
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 專業(yè): 化學(xué)反應(yīng)工程
3樓2015-06-17 15:44:14
王彬2014
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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4樓2015-06-18 08:24:43
5樓2015-10-28 12:00:46
songbird81
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
| 這里你所提供的信息還是不夠具體，需要進(jìn)行一些對(duì)比試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證哪里出了問(wèn)題，但說(shuō)明一點(diǎn)，以往能做成功，現(xiàn)在做不出來(lái)，一定有地方有問(wèn)題，無(wú)非就是四種情況：第一，一抗交聯(lián)二氧化硅是否有問(wèn)題？？第二：抗原是否有問(wèn)題？第三，二抗標(biāo)記熒光素是否有問(wèn)題？？第四，所用的各種Buffer是否有問(wèn)題？？需要用合格的東西，來(lái)一一排除驗(yàn)證，我分析，抗原，一抗，二抗變壞的可能性不大，除非你儲(chǔ)存不當(dāng)或使用不當(dāng)，導(dǎo)致蛋白失活。 |
6樓2015-10-30 15:47:56
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