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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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欣然回憶

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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注冊: 2012-12-15
性別: MM
專業(yè): 中藥學(xué)其他科學(xué)問題

[求助] 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在G418抗生素存在時細(xì)胞可活，但Western測不到目的蛋白？？？？已有1人參與

G418篩選濃度為300ug/mL，用的是QIAGEN的Effectene轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染后的30天，細(xì)胞大量存活，于是用Western檢測，但是檢測不到目的蛋白，是不是我沒有進行挑選單克隆這一個步驟，導(dǎo)致拷貝數(shù)不同的細(xì)胞都混合起來了，于是得不到轉(zhuǎn)染目的基因成功的細(xì)胞呢？可是為什么我的細(xì)胞又能在G418里存活？求解？？萬分感謝��！

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1樓 2015-06-16 23:39:57

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董博士

金蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 155 (高中生)
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紅花: 24
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在線: 96.2小時
蟲號: 3524307
注冊: 2014-11-07
專業(yè): 醫(yī)學(xué)圖像數(shù)據(jù)處理與分析

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞篩選過程中，挑單克隆這步是不能省的，而且你挑出來的不一定就都是陽性克隆，細(xì)胞時間久了也會對G418產(chǎn)生抗性，就有可能形成很多陰性克隆

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回復(fù)此樓

醫(yī)學(xué)&統(tǒng)計學(xué)

2樓2015-06-17 15:05:52

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