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[求助]
PMD-19-t載體連接問(wèn)題，真心求助 已有18人參與
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| 目的基因500多bp，pcr用的酶是：Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0 plus dye)，膠回收后連接，怎么都連接不上，求幫助。 |
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yangjingjing
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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18樓2015-06-24 10:51:18
jiqinger
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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- 專(zhuān)業(yè): 化學(xué)環(huán)境污染與健康
2樓2015-06-23 15:07:30
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我用的是takara公司的Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0 plus dye)酶p我的目的基因（500多bp），之后膠回收，濃度在70ng/ul左右，用膠回收的目的基因和pmd-18載體連接，用NEB公司的連接酶10ul體系：載體1ul，目的基因2ul，2X的buffer 5ul，DNA連接酶 0.5ul，水1.5ul，在25度溫度下連接2h，做菌液PCR沒(méi)有條帶，提質(zhì)粒跑核酸電泳，用空載體對(duì)照，結(jié)果條帶顯示一致，就是沒(méi)連接上。我也用過(guò)takara的連接體系，過(guò)夜連接，結(jié)果都是沒(méi)連接上。 |
3樓2015-06-23 15:44:56
4樓2015-06-23 16:10:29
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