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yipiantonger

新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 化學(xué)生物學(xué)與生物有機化學(xué)

[求助] 求大神指點！為什么我的β-葡萄糖醛酸酶與底物x-gluc作用不顯色? 謝謝已有1人參與

各位師兄師姐好！本人在做大腸桿菌的檢測，想通過其產(chǎn)生的β-葡萄糖醛酸酶與底物x-gluc作用顯藍色來肉眼鑒定。剛開始我用的標(biāo)準酶和底物先反應(yīng)試試。購買的sigma的β-葡萄糖醛酸酶，用PBS溶解，配制成1mg/ml溶液，分裝后保存于-20度。底物購買的是Amresco分裝的x-gluc粉末，回來后用DMF溶解，配成20mM的母液，分裝后避光保存于-20度。實驗時，將酶用PBS稀釋成1ug/ml，底物用超純水稀釋成4mM, 各取20ul混合于離心管中，操作在避光條件下，置于室溫反應(yīng)，然后我就等啊等，就是不顯色。后來我又查文獻，說x-gluc分解后先產(chǎn)生無色的吲哚氧基中間產(chǎn)物，這個產(chǎn)物比較穩(wěn)定，再經(jīng)過氧化成為不溶的藍色沉淀，加入Fecl3可以促進中間產(chǎn)物的氧化。所以，我又加了20ul的0.2mM的Fecl3，可是，一晚上都過去了，還是不顯色！好郁悶啊，求各位哥哥姐姐指教！

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求助治療抑郁的欣百達(鹽酸度洛西汀腸溶膠囊的說明書，最好是PDF版本的！已經(jīng)有8人回復(fù)

1樓 2015-07-03 10:10:36

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cxz-lh

銅蟲 (小有名氣)

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專業(yè): 有機合成

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2018-08-28 08:06:55

是不是溶液pH的問題，β-葡萄糖醛酸酶的最適pH在5左右。再或者是不是溶液太稀了，看不到產(chǎn)生的沉淀，可以響應(yīng)結(jié)束后，加入適量有機溶劑，測溶液的吸收波長確定有沒有生成藍色物質(zhì)

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回復(fù)此樓

2樓2018-08-27 19:40:38

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