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yipiantonger新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求大神指點(diǎn)！為什么我的β-葡萄糖醛酸酶與底物x-gluc作用不顯色? 謝謝 已有1人參與
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| 各位師兄師姐好！本人在做大腸桿菌的檢測(cè)，想通過(guò)其產(chǎn)生的β-葡萄糖醛酸酶與底物x-gluc作用顯藍(lán)色來(lái)肉眼鑒定。剛開始我用的標(biāo)準(zhǔn)酶和底物先反應(yīng)試試。購(gòu)買的sigma的β-葡萄糖醛酸酶，用PBS溶解，配制成1mg/ml溶液，分裝后保存于-20度。底物購(gòu)買的是Amresco分裝的x-gluc粉末，回來(lái)后用DMF溶解，配成20mM的母液，分裝后避光保存于-20度。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將酶用PBS稀釋成1ug/ml，底物用超純水稀釋成4mM, 各取20ul混合于離心管中，操作在避光條件下，置于室溫反應(yīng)，然后我就等啊等，就是不顯色。后來(lái)我又查文獻(xiàn)，說(shuō)x-gluc分解后先產(chǎn)生無(wú)色的吲哚氧基中間產(chǎn)物，這個(gè)產(chǎn)物比較穩(wěn)定，再經(jīng)過(guò)氧化成為不溶的藍(lán)色沉淀，加入Fecl3可以促進(jìn)中間產(chǎn)物的氧化。所以，我又加了20ul的0.2mM的Fecl3，可是，一晚上都過(guò)去了，還是不顯色！好郁悶啊，求各位哥哥姐姐指教！ |
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2樓2018-08-27 19:40:38
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