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PCR產(chǎn)物用PMD 19T載體 16℃過(guò)夜連接后，與DH5感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，涂平板，挑菌，液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后，菌液變渾濁，然后做了菌落PCR有目的條帶，送公司測(cè)序，公司說(shuō)菌落濃度太低，這是為什么？是我感受態(tài)的問(wèn)題嗎

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1樓 2015-07-04 23:14:09

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送測(cè)序的菌需要繼續(xù)培養(yǎng)的，只是渾濁肯定不行，因?yàn)樗麄円惨瘸橘|(zhì)粒再測(cè)序的。菌落pcr和測(cè)序?qū)鷿舛纫髴?yīng)該不一樣的。

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4樓2015-07-05 14:56:56

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dehong1573

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qaz139687: 金幣+2, ★★★很有幫助 2015-07-06 16:02:13

換家公司吧，如果可以的話，菌溶度不夠他們不會(huì)搖啊

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科學(xué)永無(wú)止境,只有合作共享才能更好地……

8樓2015-07-06 07:49:14

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來(lái)個(gè)人指點(diǎn)指點(diǎn)啊

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2樓2015-07-05 13:25:08

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a13515517892

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公司可以幫你轉(zhuǎn)化了之后再抽提質(zhì)粒測(cè)序的，估計(jì)是他們不愿意

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3樓2015-07-05 14:42:12

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引用回帖:

4樓: Originally posted by ppppppppp at 2015-07-05 14:56:56
送測(cè)序的菌需要繼續(xù)培養(yǎng)的，只是渾濁肯定不行，因?yàn)樗麄円惨瘸橘|(zhì)粒再測(cè)序的。菌落pcr和測(cè)序?qū)鷿舛纫髴?yīng)該不一樣的。

我培養(yǎng)了5h后，做完菌落PCR就送去測(cè)序了，不是說(shuō)搖菌太久的話會(huì)細(xì)菌死亡或者是amp會(huì)失效？請(qǐng)問(wèn)下?lián)u菌的話搖多少小時(shí)后送測(cè)比較好，之前一次搖了24個(gè)小時(shí)，公司說(shuō)我的細(xì)菌都不長(zhǎng)，說(shuō)我搖太久了。另外菌液送公司的話，公司不是也會(huì)培養(yǎng)的嘛

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5樓2015-07-05 19:24:19

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3樓: Originally posted by a13515517892 at 2015-07-05 14:42:12
公司可以幫你轉(zhuǎn)化了之后再抽提質(zhì)粒測(cè)序的，估計(jì)是他們不愿意

你的意思是可以送PCR產(chǎn)物，讓他們幫忙連接轉(zhuǎn)化搖菌在提質(zhì)粒嗎

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6樓2015-07-05 19:52:56

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qaz139687: 金幣+1, ★有幫助 2015-07-06 16:01:51

引用回帖:

5樓: Originally posted by qaz139687 at 2015-07-05 19:24:19
我培養(yǎng)了5h后，做完菌落PCR就送去測(cè)序了，不是說(shuō)搖菌太久的話會(huì)細(xì)菌死亡或者是amp會(huì)失效？請(qǐng)問(wèn)下?lián)u菌的話搖多少小時(shí)后送測(cè)比較好，之前一次搖了24個(gè)小時(shí)，公司說(shuō)我的細(xì)菌都不長(zhǎng)，說(shuō)我搖太久了。另外菌液送公司的話 ...

12-18小時(shí)之間吧，24太長(zhǎng)，5小時(shí)又太短了

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7樓2015-07-05 20:56:35

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小爺不狂91

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9樓2015-07-06 08:12:15

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9樓: Originally posted by 小爺不狂91 at 2015-07-06 08:12:15
你怎么想的呢，到了這一步，你還用未純化的pcr產(chǎn)物干嘛？如果你的菌液長(zhǎng)起來(lái)了，直接取600～1000ul送公司測(cè)序，他們會(huì)提取質(zhì)粒的，實(shí)在不放心，自己提取質(zhì)粒做了驗(yàn)證有目的基因送質(zhì)粒去測(cè)序，畢竟公司工作的都是本科 ...

可能是我描述有問(wèn)題，我是做完菌液PCR后，有條帶，送的是菌液，不是PCR產(chǎn)物。。

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10樓2015-07-06 15:59:48

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