 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (5642)
- >考研 (2515)
- >導(dǎo)師招生 (2130)
- >文獻(xiàn)求助 (358)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (335)
- >碩博家園 (184)
- >休閑灌水 (162)
- >考博 (103)
- >招聘信息布告欄 (90)
- >基金申請(qǐng) (86)
- >博后之家 (69)
- >綠色求助(高懸賞) (48)
- >論文投稿 (47)
- >材料綜合 (24)
- >外文書(shū)籍求助 (17)
- >教師之家 (15)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3617 | 回復(fù): 15 | |||
銀小耳金蟲(chóng) (小有名氣)
|
[交流]
感受態(tài)轉(zhuǎn)化及陽(yáng)性克隆出現(xiàn)問(wèn)題 已有6人參與
|
||
|
大腸桿菌DH5a感受態(tài)轉(zhuǎn)化 1、從-70℃冰箱中取感受態(tài)細(xì)胞懸液,冰上解凍5min。 2、 加入連接產(chǎn)物10μl (含量不超過(guò)50ng,體積不超過(guò)10μl),輕輕彈勻,冰上放置30min。 3、42℃水浴中熱擊90秒,熱擊后迅速置于冰上冷卻3min。 4、向管中加入1ml LB液體培養(yǎng)基(不含Amp),混勻后37℃,100r/min搖床培養(yǎng)1h,使細(xì)菌恢復(fù)正常生長(zhǎng)狀態(tài) 5、將上述菌液搖勻后取100μl 涂布于LB平板上,正面向上放置半小時(shí),待菌液完全被培養(yǎng)基吸收后倒置培養(yǎng)皿,37℃培養(yǎng)16-24小時(shí)。 PCR驗(yàn)證陽(yáng)性克隆 1.使用無(wú)菌白槍頭將轉(zhuǎn)化后長(zhǎng)出的白色單菌落點(diǎn)種轉(zhuǎn)移到含有氨芐青霉素的平板上，37℃過(guò)夜培養(yǎng) 2.挑取氨芐平板上的單菌落到含氨芐的LB液體培養(yǎng)基中，180rpm/min，37℃搖床培養(yǎng)3h 3.取2ml菌液作為PCR模板，PCR反應(yīng)引物為T(mén)載體通用引物：RV-M和M13-17 4.PCR反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，排除部分假陽(yáng)性克隆片段 實(shí)驗(yàn)每次都是卡在PCR驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的第二步，37度搖床培養(yǎng)3h后培養(yǎng)基都很澄清，基本沒(méi)有菌長(zhǎng)出來(lái)，之前條白色單菌落到含氨芐的LB液體培養(yǎng)基中時(shí)，明顯可以看到菌落接進(jìn)去了呀，求大神幫幫忙看到底是哪里出了差錯(cuò)？？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有195人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
天津商業(yè)大學(xué) 生物與醫(yī)藥課題組招生
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
生物化工學(xué)碩招收調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 質(zhì)粒非單克隆，怎么辦？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 膠回收產(chǎn)物連入克隆載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，結(jié)果第二天沒(méi)有菌落長(zhǎng)出。怎么回事兒？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- Top10感受態(tài)是dam陽(yáng)性的嗎
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 克隆轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化子就是不含目的基因。
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后涂布，陰性對(duì)照培養(yǎng)皿上長(zhǎng)有一兩個(gè)菌落，能否繼續(xù)在陽(yáng)性平皿上挑單克��？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 令我崩潰的TA克隆，老是連不上
已經(jīng)有33人回復(fù)
- 克隆方面的問(wèn)題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 連接轉(zhuǎn)化假陽(yáng)性提不出來(lái)質(zhì)粒嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求助分子克隆問(wèn)題——挑不出陽(yáng)性克��！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 克隆基因，用PMD19-T載體轉(zhuǎn)天根的感受態(tài)細(xì)胞，菌落少，測(cè)的序列全是空載體，求原因·
已經(jīng)有21人回復(fù)
- T載體克隆做不出來(lái)，求幫助
已經(jīng)有24人回復(fù)
- TA克隆電擊法轉(zhuǎn)化的步驟
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后單克隆都一樣嗎
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 基因克隆過(guò)程中質(zhì)粒、感受態(tài)細(xì)胞對(duì)氨芐的抗性
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 請(qǐng)教一下，這是否為假陽(yáng)性克隆的問(wèn)題，如果是，該如何提高陽(yáng)性克隆效率？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 陽(yáng)性克隆的篩選問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 最近做T克隆都是陰性，怎么回事？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化后陽(yáng)性克隆長(zhǎng)得比較慢是什么原因？！
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 大腸桿菌DH5α感受態(tài)制備
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 我將1質(zhì)粒連在BK載體上，但是陽(yáng)性克隆鑒定一直是陰性，什么原因呢
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【專題】------------------感受態(tài)、轉(zhuǎn)化專題------------------
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 做電轉(zhuǎn)感受態(tài)時(shí)有染菌的嗎
已經(jīng)有15人回復(fù)
lairongpeng
銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 1163.6
- 散金: 58
- 紅花: 1
- 帖子: 374
- 在線: 159小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2428081
- 注冊(cè): 2013-04-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
5樓2014-04-18 20:50:23
2樓2014-04-18 17:50:23
kueradi
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 20 (小學(xué)生)
- 金幣: 1441.5
- 紅花: 2
- 帖子: 126
- 在線: 249.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2263328
- 注冊(cè): 2013-01-27
- 專業(yè): 細(xì)胞死亡
4樓2014-04-18 20:09:06
周志惠
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1927.6
- 紅花: 1
- 帖子: 195
- 在線: 211.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1781282
- 注冊(cè): 2012-04-26
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
6樓2014-04-19 08:16:13
Neo2000
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 639 (博士)
- 金幣: 8720.2
- 紅花: 37
- 帖子: 1700
- 在線: 269.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 322365
- 注冊(cè): 2007-03-11
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
3樓2014-04-18 17:55:58
zhangtao110
銀蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 25.3
- 紅花: 1
- 帖子: 186
- 在線: 132.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2364241
- 注冊(cè): 2013-03-20
- 專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
7樓2014-04-19 09:05:33
銀小耳
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 731.8
- 帖子: 274
- 在線: 102.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2020693
- 注冊(cè): 2012-09-22
- 性別: MM
- 專業(yè): 古代宗教
8樓2014-04-20 21:38:30
銀小耳
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 731.8
- 帖子: 274
- 在線: 102.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2020693
- 注冊(cè): 2012-09-22
- 性別: MM
- 專業(yè): 古代宗教
9樓2014-04-20 21:41:11
銀小耳
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 731.8
- 帖子: 274
- 在線: 102.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2020693
- 注冊(cè): 2012-09-22
- 性別: MM
- 專業(yè): 古代宗教
10樓2014-04-20 21:43:36
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 銀小耳 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 372分材料與化工（085600）一志愿湖南大學(xué)求調(diào)劑 +4 | 藍(lán)箋片 2026-04-02 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-04-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +13 | 呼吸都是減肥 2026-04-01 | 13/650 |
|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)，080500學(xué)碩，317分，求調(diào)劑 +12 | s1145 2026-03-31 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +15 | 勒布朗@ 2026-03-31 | 20/1000 |
|
|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +6 | 小懶蟲(chóng)不懶了 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程調(diào)劑 +18 | 深V宿舍吧 2026-03-30 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +14 | 一樣YWY 2026-04-01 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交大材料學(xué)碩（英一數(shù)二）347，求調(diào)劑到高分子/材料相關(guān)專業(yè) +7 | zju51 2026-03-31 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 生物與醫(yī)藥考研調(diào)劑 +5 | 鐵憨憨123425 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-30 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +6 | 吃的不少 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600，321分求調(diào)劑 +13 | 大饞小子 2026-03-31 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +4 | 阿科逸 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 080200學(xué)碩，機(jī)械工程專業(yè)277分，求帶走！ +4 | 瓶子PZ 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +6 | Faune 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 青春裁為三截 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑 +6 | 零八# 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 356求調(diào)劑 +3 | gysy?s?a 2026-03-28 | 3/150 |
|